适用场景
HER2+/ER+ BT-474 侧腹皮下 CDX，常需外源雌激素与 Matrigel，用于抗 HER2 药评。本 SOP 取 Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1；E2 1.7 mg / 90 天，接种前 3 天。Lai 对照为同细胞数 / 200 μL GFR Matrigel，E2 1.7 mg，接种前 7 天。不是脂肪垫原位。不要套用 MDA-MB-231 的 2×10⁶ / 100 μL，也不要把 Price 1990 当 BT-474 剂量。
仅供科研（RUO）。必须 IACUC 与 SPF。细胞数/体积/麻醉以本协议化合物卡和 PMID 为准，禁止照搬 MDA-MB-231。批件可覆盖文献麻醉数字。不替代兽医 SOP。
用途一览
本页只做局部皮下 CDX。第 4 垫原位见另一协议。Price 1990 是 MDA-MB-231/435，不是 BT-474。
流程是否一致
抗 HER2 药筛共用本页皮下骨架；脂肪垫请换协议。
| 用途 | 与傻瓜流程关系 | 相对核心 SOP 的差异 |
|---|---|---|
| 抗 HER2 皮下药筛 | 共用核心 SOP | 即本页 Chen 1×10⁷ / 100 μL。 |
| 脂肪垫原位 | 换路径 / 协议 | Cornelius 2×10⁷ 或 Chen luc 4×10⁶，不是皮下 100 μL。 |
宿主规格：性别 × 品系 × 雌激素
人源 BT-474 用免疫缺陷雌鼠 + 外源雌激素。RUO。
| 研究场景 / 癌种语境 | 性别 | 品系 / 宿主 | 说明 |
|---|---|---|---|
| 本 SOP 默认：皮下抗 HER2 药筛 | 雌性 | 裸鼠（Chen / Lai） | Chen：1×10⁷ / 100 μL 1:1 胶；E2 1.7 mg / 90 天，接种前 3 天[1]。 |
| 雄性 | 不推荐 | — | 乳腺 HER2 模型以雌性为准。 |
一句话造模
伦理 + 雌激素方案 → 扩培 → 皮下接种（Matrigel）→ 测瘤径 → 可选给药 → 终点病理。
D−1 / D0 时间轴
1. D−7 至 D−3
检疫；核对性别/品系/终点与 IACUC。
2. D−1
换液，80–90% 汇合。
3. D0
按配方卡接种（Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1。Lai 对照 1×10⁷ / 200 μL GFR Matrigel）。
4. 此后
按监测表；触发终点则停。
流程概览
以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。
- 伦理批件 + 雌性裸鼠检疫
- STR/支原体合格；扩培亲本 BT-474
- 按批件植入 E2 丸（Chen：接种前 3 天）
- 消化计数（活力 ≥90%）
- 1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1（Chen）
- 侧腹皮下成皮丘
- 每周测瘤径与体重
- 达预定体积后随机给药
- 终点取瘤病理
新手操作包（文献案例）
流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。
开箱清单（按每只鼠规划）
有货号的链到本站产品。培养基以 MC-h028 说明书为准。Matrigel 仅当化合物卡列出。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。[1]
| 物品 | 每只鼠 / 本研究 | 说明 |
|---|---|---|
| BT-474 细胞 MC-h028 | 1 支起扩 | STR / 支原体合格；记代次 |
| 胎牛血清 FBS MC100 | 完全培养液按说明书 | 优先常规级 |
| 无钙镁 PBS / 无血清培养液 | 重悬；体积见配方卡 | 按 SOP |
| T75 或 10 cm 皿 | 见扩培表 | 对数期收获；T75 产量按约 5×10⁶ 规划，非该株测定 |
| Matrigel（仅当本协议使用） | 按化合物卡 | 冰上；未写则不要加 |
| 注射器 / 针 | 每只 1 支 + 备用 | 规格见接种核对卡与原文 |
| 外源雌激素（丸剂/缓释，按批件） | 接种前植入（背侧皮下，远离接种点） | Chen：1.7 mg / 90 天，接种前 3 天。Lai：1.7 mg，接种前 7 天。Cornelius 原位：0.72 mg / 90 天，接种前 3 天。毫克数不是默认可抄剂量。 |
扩培案例：只数 vs T75
按本协议出现的最高细胞数 1e+7 规划；死腔倍数 ×1.2。不要套用 MDA-MB-231 原位 2×10⁶ 公式。
| 动物（只） | T75（瓶） |
|---|---|
| 1 | 3 |
| 2 | 5 |
| 3 | 8 |
| 4 | 10 |
| 5 | 12 |
| 6 | 15 |
| 7 | 17 |
| 8 | 20 |
| 9 | 22 |
| 10 | 24 |
接种配方卡
本 SOP 剂量字符串：Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1。Lai 对照 1×10⁷ / 200 μL GFR Matrigel。整批按只数 ×1.2 补偿死腔，打一只吸一只。[1]
| 项目 | 本 SOP | 注意 |
|---|---|---|
| 细胞数 / 体积 | Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1。Lai 对照 1×10⁷ / 200 μL GFR Matrigel | 以原文 Methods 为准，预实验 n=3–5 |
| 基质 | 仅当化合物卡列出 | 勿从别的株抄 1:1 或 25% |
| 时间窗 | 冰上，尽快打完（常 30–60 min） | 超时重悬或弃用 |
| 活力 | ≥90% 单细胞 | 低于 90% 或有团块：不注射 |
接种 / 手术核对卡
侧腹皮下成皮丘，避开肌层。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。
| 核对项 | 通过 | 失败时 |
|---|---|---|
| 部位 | 侧腹皮下皮丘 | 打入肌层：该点失败 |
| 针 | 常用 25–27G；按文献 | 勿默认原位结核菌素死腔 |
| 基质 | 仅当本协议化合物卡写了 Matrigel | 静脉路径禁止套 Matrigel |
| 空气 / 团块 | 排气；镜下单细胞 | 有团块：不注射 |
细胞培养卡（BT-474 / MC-h028）
倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
以本站说明书为准。汇合度 = 贴壁面积百分比；示意图非真实显微照片。[1]
| 项目 | 做法 |
|---|---|
| 培养基 | 说明书优先（MC-h028）。体内接种前按该株习惯换液。 |
| 汇合 80–90%（收获） | 几乎铺满仍有细小空隙，勿层层叠加。过稀产量不够；长满后活力下降，不宜接种。 |
| 代次 | 体内固定低–中代次窗口并记录；标记株须验证表型。 |
| 接种日前一天 | 换液；镜检形态；按只数备 T75。 |
成功标准（预期，非承诺）
动力学因品系、代次、细胞数而异，须预实验。达不到时先查失败排查，不要盲目加细胞。[1]
| 时间点 | 常见表现 |
|---|---|
| 接种当日 | 局部鼓起；无持续漏液；复苏后活动可 |
| 随访窗 | 皮下瘤体积/重量、体重、病理。 |
| 成瘤/定植率 | 批次会变；预实验 n≈3–5 |
失败排查
涉及动物福利的立即按批件执行，不要在网页上临时加剂量或麻醉浓度。
| 现象 | 常见原因 | 处理 |
|---|---|---|
| 悬液团块 / 堵针 | 消化不全或胶凝固 | 不注射；回冰或弃管 |
| 路径失败体征 | 漏液或打错层次 | 该只退出主分析；对照核对卡 |
| 窗口内无读出 | 假注射、细胞不活、剂量/宿主不符 | 先核对记录与原文，勿照搬其他株加量 |
| 体重骤降 / 呼吸差 / 溃疡 | 负荷或手术并发症 | 立即人道终点 |
监测记录字段
体积 ≈ 长 × 宽² / 2。溃疡与体重优先于「再等几天」。
| 字段 | 如何记 |
|---|---|
| 日期 / D0 | 接种日 |
| 鼠号 / 组别 / 代次 | 随机后锁定 |
| 路径是否成功 | 是 / 否（失败原因） |
| 体重 (g) | 与观察同一天；骤降触发终点 |
| 瘤径 | L、W；体积 ≈ L×W²/2 |
- 01【伦理】IACUC；雌性免疫缺陷鼠。RUO。Chen/Lai 皮下未给麻醉 mg/%；需要制动时按批件。写明溃疡、体重与雌激素相关人道终点。
- 02
- 03
- 04
- 05【接种】侧腹皮下成皮丘，避开肌层。丸剂与接种点分开。
本 SOP 剂量字符串：Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1。Lai 对照 1×10⁷ / 200 μL GFR Matrigel。整批按只数 ×1.2 补偿死腔，打一只吸一只。[1]
项目 本 SOP 注意 细胞数 / 体积 Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1。Lai 对照 1×10⁷ / 200 μL GFR Matrigel 以原文 Methods 为准，预实验 n=3–5 基质 仅当化合物卡列出 勿从别的株抄 1:1 或 25% 时间窗 冰上，尽快打完（常 30–60 min） 超时重悬或弃用 活力 ≥90% 单细胞 低于 90% 或有团块：不注射 侧腹皮下成皮丘，避开肌层。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。
核对项 通过 失败时 部位 侧腹皮下皮丘 打入肌层：该点失败 针 常用 25–27G；按文献 勿默认原位结核菌素死腔 基质 仅当本协议化合物卡写了 Matrigel 静脉路径禁止套 Matrigel 空气 / 团块 排气；镜下单细胞 有团块：不注射 - 06【监测】体积 ≈ L×W²/2（Lai；本站同口径）[2]。
- 07【终点】取瘤病理。皮下不以转移为成功标准。
试剂 / 材料
| 名称 | 用途 | 浓度 / 用量 |
|---|---|---|
| BT-474 细胞（MC-h028） | 接种细胞 | Chen：1×10⁷ / 100 μL PBS:Matrigel 1:1。Lai 对照 1×10⁷ / 200 μL GFR Matrigel |
| Matrigel（常用） | 助植 | 常 1:1，按 SOP |
| 外源雌激素（缓释丸 / 批件规格） | 支持 HER2+/ER+ BT-474 成瘤 | 规格只来自 IACUC。文献对照：Chen 1.7 mg / 90 天，接种前 3 天；Lai 1.7 mg，接种前 7 天；Cornelius 原位 0.72 mg / 90 天，接种前 3 天。不要把网页毫克数当唯一正确。 |
| 麻醉剂 / 镇痛药 | 手术与福利 | Chen/Lai 皮下未给麻醉 mg/%；需要制动时按批件 |
| 受试药物 / 溶剂对照（可选） | 治疗臂 | 按药理方案 |
读出指标
皮下瘤体积/重量、体重、病理。
参考文献（PubMed）
- [1]PMID 30297810 — Ultrasmall targeted nanoparticles with engineered antibody fragments for imaging detection of HER2-overexpressing breast cancer. Nat Commun (2018)
- [2]PMID 21876713 — The Potential Utility of Curcumin in the Treatment of HER-2-Overexpressed Breast Cancer: An In Vitro and In Vivo Comparison Study with Herceptin. Evid Based Complement Alternat Med (2012)
- [3]PMID 212572 — Isolation of two human tumor epithelial cell lines from solid breast carcinomas. J Natl Cancer Inst (1978)
- [4]PMID 94035 — A human breast tumor cell line (BT-474) that supports mouse mammary tumor virus replication. In Vitro (1979)
免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。