适用场景
后肢/第 4 乳腺脂肪垫接种 ER+ T47D，通常需外源雌激素。本 SOP 取 Holen：5×10⁵ / 20 μL（50% Matrigel:50% PBS），左右后肢脂肪垫；E2 丸接种前 3 天。Matsunaga 对照：5×10⁶ / 100 μL 50% Matrigel，第 4 垫，E2 0.5 mg / 60 天，接种前 1 天。不是 Price 1990，也不是 231 的 2×10⁶ / 100 μL。
仅供科研（RUO）。必须 IACUC 与 SPF。细胞数/体积/麻醉以本协议化合物卡和 PMID 为准，禁止照搬 MDA-MB-231。批件可覆盖文献麻醉数字。不替代兽医 SOP。
用途一览
只要局部原位成瘤/内分泌药效请走本页。皮下 Lee 与 Price 1990 都不是本针。
流程是否一致
脂肪垫原位共用本页骨架；皮下换路径。
| 用途 | 与傻瓜流程关系 | 相对核心 SOP 的差异 |
|---|---|---|
| 脂肪垫原位 | 共用核心 SOP | 即本页 Holen 5×10⁵ / 20 μL。 |
| 皮下 CDX | 换路径 / 协议 | Lee 2×10⁶ 侧腹，不是 20 μL 垫内。 |
宿主规格：性别 × 品系 × 雌激素
Holen 默认雌鼠 + 接种前 3 天 E2 丸。Matsunaga 用 NOD/SCID。RUO。
| 研究场景 / 癌种语境 | 性别 | 品系 / 宿主 | 说明 |
|---|---|---|---|
| 本 SOP 默认：后肢垫原位 | 雌性 | 免疫缺陷鼠（Holen） | 5×10⁵ / 20 μL 50% Matrigel；E2 接种前 3 天[1]。 |
一句话造模
伦理 + 雌激素 → 扩培 → 脂肪垫接种 → 测瘤径 → 终点病理。
D−1 / D0 时间轴
1. D−7 至 D−3
检疫；核对性别/品系/终点与 IACUC。
2. D−1
换液，80–90% 汇合。
3. D0
按配方卡接种（Holen：5×10⁵ / 20 μL 50% Matrigel:PBS。Matsunaga 对照 5×10⁶ / 100 μL 50% Matrigel）。
4. 此后
按监测表；触发终点则停。
流程概览
以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。
- 伦理批件 + 雌鼠检疫
- 按批件植入 E2 丸（Holen：接种前 3 天）
- STR 合格；扩培亲本 T47D
- 5×10⁵ / 20 μL 50% Matrigel:PBS
- 左右后肢脂肪垫注射
- 每周测瘤径与体重
- 终点原位病理（骨读出仅批件写明时）
新手操作包（文献案例）
流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。
开箱清单（按每只鼠规划）
有货号的链到本站产品。培养基以 MC-h209 说明书为准。Matrigel 仅当化合物卡列出。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。[1]
| 物品 | 每只鼠 / 本研究 | 说明 |
|---|---|---|
| T47D 细胞 MC-h209 | 1 支起扩 | STR / 支原体合格；记代次 |
| 胎牛血清 FBS MC100 | 完全培养液按说明书 | 优先常规级 |
| 无钙镁 PBS / 无血清培养液 | 重悬；体积见配方卡 | 按 SOP |
| T75 或 10 cm 皿 | 见扩培表 | 对数期收获；T75 产量按约 5×10⁶ 规划，非该株测定 |
| Matrigel（仅当本协议使用） | 按化合物卡 | 冰上；未写则不要加 |
| 注射器 / 针 | 每只 1 支 + 备用 | 规格见接种核对卡与原文 |
| 外源雌激素（丸剂/缓释，按批件） | 接种前植入（背侧皮下，远离接种点） | Lee：60 天丸，接种前 7 天。Holen：接种前 3 天。Matsunaga：0.5 mg / 60 天，接种前 1 天。毫克数不是默认可抄剂量。 |
扩培案例：只数 vs T75
按本协议出现的最高细胞数 5e+5 规划；死腔倍数 ×1.5。不要套用 MDA-MB-231 原位 2×10⁶ 公式。
| 动物（只） | T75（瓶） |
|---|---|
| 1 | 1 |
| 2 | 1 |
| 3 | 1 |
| 4 | 1 |
| 5 | 1 |
| 6 | 1 |
| 7 | 2 |
| 8 | 2 |
| 9 | 2 |
| 10 | 2 |
接种配方卡
本 SOP 剂量字符串：Holen：5×10⁵ / 20 μL 50% Matrigel:PBS。Matsunaga 对照 5×10⁶ / 100 μL 50% Matrigel。整批按只数 ×1.5 补偿死腔，打一只吸一只。[1]
| 项目 | 本 SOP | 注意 |
|---|---|---|
| 细胞数 / 体积 | Holen：5×10⁵ / 20 μL 50% Matrigel:PBS。Matsunaga 对照 5×10⁶ / 100 μL 50% Matrigel | 以原文 Methods 为准，预实验 n=3–5 |
| 基质 | 仅当化合物卡列出 | 勿从别的株抄 1:1 或 25% |
| 时间窗 | 冰上，尽快打完（常 30–60 min） | 超时重悬或弃用 |
| 活力 | ≥90% 单细胞 | 低于 90% 或有团块：不注射 |
接种 / 手术核对卡
第 4 乳腺脂肪垫，不是侧腹皮下。必看该株 JoVE/文献。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。
| 核对项 | 通过 | 失败时 |
|---|---|---|
| 标志 | 第 4 乳头 / 脂肪垫 | 打成皮下皮丘：该点失败 |
| 推注 | 缓慢至局部鼓起，防漏 | 立即漏液：该点失败 |
| 空气 / 团块 | 排气；镜下单细胞 | 有团块：不注射 |
细胞培养卡（T47D / MC-h209）
倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
以本站说明书为准。汇合度 = 贴壁面积百分比；示意图非真实显微照片。[1]
| 项目 | 做法 |
|---|---|
| 培养基 | 说明书优先（MC-h209）。体内接种前按该株习惯换液。 |
| 汇合 80–90%（收获） | 几乎铺满仍有细小空隙，勿层层叠加。过稀产量不够；长满后活力下降，不宜接种。 |
| 代次 | 体内固定低–中代次窗口并记录；标记株须验证表型。 |
| 接种日前一天 | 换液；镜检形态；按只数备 T75。 |
成功标准（预期，非承诺）
动力学因品系、代次、细胞数而异，须预实验。达不到时先查失败排查，不要盲目加细胞。[1]
| 时间点 | 常见表现 |
|---|---|
| 接种当日 | 局部鼓起；无持续漏液；复苏后活动可 |
| 随访窗 | 原位瘤体积、病理；骨读出仅批件写明时。 |
| 成瘤/定植率 | 批次会变；预实验 n≈3–5 |
失败排查
涉及动物福利的立即按批件执行，不要在网页上临时加剂量或麻醉浓度。
| 现象 | 常见原因 | 处理 |
|---|---|---|
| 悬液团块 / 堵针 | 消化不全或胶凝固 | 不注射；回冰或弃管 |
| 路径失败体征 | 漏液或打错层次 | 该只退出主分析；对照核对卡 |
| 窗口内无读出 | 假注射、细胞不活、剂量/宿主不符 | 先核对记录与原文，勿照搬其他株加量 |
| 体重骤降 / 呼吸差 / 溃疡 | 负荷或手术并发症 | 立即人道终点 |
监测记录字段
体积 ≈ 长 × 宽² / 2。溃疡与体重优先于「再等几天」。
| 字段 | 如何记 |
|---|---|
| 日期 / D0 | 接种日 |
| 鼠号 / 组别 / 代次 | 随机后锁定 |
| 路径是否成功 | 是 / 否（失败原因） |
| 体重 (g) | 与观察同一天；骤降触发终点 |
| 瘤径 | L、W；体积 ≈ L×W²/2 |
- 01【伦理】IACUC；雌性免疫缺陷鼠。RUO。Holen/Matsunaga 未给接种麻醉 mg/%；需要制动时按批件。写明体重与雌激素相关终点。
- 02
- 03
- 04【手术】后肢脂肪垫（Holen）或第 4 垫（Matsunaga）缓慢注射。不是侧腹皮下。
- 05【监测】体积 ≈ 4/3 π r³（Holen；r=(L+W)/4）[1]。不要与别的公式混用。
- 06【终点】原位病理。骨转移仅当批件写明随访方案时才作为读出。
试剂 / 材料
| 名称 | 用途 | 浓度 / 用量 |
|---|---|---|
| T47D 细胞（MC-h209） | 接种细胞 | Holen：5×10⁵ / 20 μL 50% Matrigel:PBS。Matsunaga 对照 5×10⁶ / 100 μL 50% Matrigel |
| Matrigel（常用） | 助植 | 常 1:1，按 SOP |
| 外源雌激素（缓释丸 / 批件规格） | 支持 ER+/PR+ T47D 成瘤 | 规格只来自 IACUC。文献对照：Lee 60 天丸，接种前 7 天；Holen 接种前 3 天植入；Matsunaga 0.5 mg / 60 天，接种前 1 天。不要把网页毫克数当唯一正确。 |
| 麻醉剂 / 镇痛药 | 手术与福利 | Holen/Matsunaga 未给接种麻醉 mg/%；需要制动时按批件 |
| 受试药物 / 溶剂对照（可选） | 治疗臂 | 按药理方案 |
读出指标
原位瘤体积、病理；骨读出仅批件写明时。
参考文献（PubMed）
- [1]PMID 26585891 — Oestrogen receptor positive breast cancer metastasis to bone: inhibition by targeting the bone microenvironment in vivo. Clin Exp Metastasis (2016)
- [2]PMID 33535554 — Novel Anti-FOLR1 Antibody-Drug Conjugate MORAb-202 in Breast Cancer and Non-Small Cell Lung Cancer Cells. Antibodies (Basel) (2021)
- [3]PMID 228940 — Establishment and characterization of a cell line of human breast carcinoma origin. Eur J Cancer (1979)
免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。