适用场景
用 HCT116 评估化合物或基因扰动对增殖/存活的影响。
一句话造模
扩培 → 铺板 → 加药梯度 → 活力/凋亡读出。
流程概览
- 01扩培记代次
- 02铺板过夜
- 03加药梯度+溶剂对照
- 0424–72 h 孵育
- 05活力检测
- 06计算 IC₅₀
- 07独立重复
- 01【准备】确认 HCT116 完全培养液与生长条件；支原体抽检合格。
- 02【铺板】消化计数，接种使加药时约 40–70% 汇合；过夜贴壁。
- 03【加药】溶剂对照 + ≥5 点对数梯度；DMSO 终浓度建议 ≤0.1–0.5%。
- 04【孵育】常用 24–72 h。
- 05【活力】MTT / CCK-8 / CTG；≥3 复孔。
- 06【可选】凋亡（Annexin V）或克隆形成。
- 07【计算】抑制率与 IC₅₀；独立重复 ≥2–3 次。
- 08【质控】记录代次与血清批次。
试剂 / 化合物
| 名称 | 作用 | 浓度 |
|---|---|---|
| 受试化合物 | 药敏/机制 | 对数梯度，预实验优化 |
| 溶剂对照 | 排除溶剂假象 | 等体积分数 |
| 活力试剂（MTT/CCK-8/CTG） | 定量存活 | 按说明书 |
读出指标
活力曲线、IC₅₀、可选凋亡/克隆。
文献与说明书
- [1]PubMedPMID 7214342In Vitro · 1981New human tumor cell lines: establishment and characterization.
- [2]PubMedPMID 10910091J Biol Chem · 2000Genetic disruption of DNA topoisomerase I and II in HCT116.
- [3]PubMedPMID 6606682J Immunol Methods · 1983Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival.