适用场景
用 Ishikawa 在二维培养下评估化合物或基因扰动对增殖/存活的影响，是实体瘤体外机制与药敏的基础读出。
一句话造模
稳定传代 → 铺板过夜 → 加药梯度 → 定时活力/凋亡读出 → 与溶剂对照比较。
流程概览
- 01复苏扩培，记录代次
- 02接种孔板至适宜密度
- 03过夜贴壁 / 稳定
- 04加入浓度梯度 + 溶剂对照
- 05培养至预定终点
- 06活力 / 凋亡检测
- 07计算 IC₅₀ 或抑制率
- 01【准备】确认完全培养液与生长条件（与随货说明书核对）；关键实验前支原体抽检合格。
- 02【铺板】消化计数，按预实验密度接种（常见使加药时 40–70% 汇合）；贴壁株过夜，悬浮株按密度接种后即可处理。
- 03【加药】设置溶剂对照与 ≥5 点对数浓度梯度；阳性对照药可选。DMSO 终浓度建议 ≤0.1–0.5%（按 SOP）。
- 04【孵育】常用 24–72 h（依化合物与课题）；期间避免频繁开门晃板。
- 05【活力】用 MTT / CCK-8 / CellTiter-Glo 等按说明书检测；每组 ≥3 复孔。
- 06【可选凋亡】Annexin V / Caspase 或 DNA 片段化，区分抑制增殖与诱导死亡。
- 07【可选克隆】低密度接种后长期培养（约 1–3 周）结晶紫染色计克隆。
- 08【计算】抑制率 = 1 − (处理/对照)；拟合 IC₅₀；独立重复 ≥2–3 次。
- 09【质控】记录代次与血清批次；异常孔剔除并备注。
试剂 / 化合物
| 名称 | 作用 | 浓度 |
|---|---|---|
| 受试化合物 / 抑制剂 | 药敏或机制干预 | 对数梯度；按文献与预实验优化 |
| 溶剂对照（DMSO 等） | 排除溶剂假象 | 与最高药组等体积分数 |
| 活力检测试剂（MTT / CCK-8 / CTG） | 定量存活/代谢活性 | 按试剂盒说明书 |
读出指标
① 活力曲线 / IC₅₀；② 可选凋亡；③ 可选克隆形成；④ 形态。
文献与说明书
- [1]PubMedPMID 4031568Nihon Sanka Fujinka Gakkai zasshi · 1985[Establishment of a new human endometrial adenocarcinoma cell line, Ishikawa cells, containing estrogen and progesterone receptors].
- [2]PubMedPMID 10381137Cancer letters · 1998In vitro effects of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) analogue on cancer cell sensitivity to cis-platinum.
- [3]PubMedPMID 6606682J Immunol Methods · 1983Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.
- [4]PubMedPMID 16740937Nat Protoc · 2006Clonogenic assay of cells in vitro.
- [5]PubMedPMID 2135685J Exp Med · 1990Early redistribution of plasma membrane phosphatidylserine is a general feature of apoptosis.