适用场景
第 4 乳腺脂肪垫接种 ER+ MCF-7，通常需外源雌激素。本 SOP 取 Dall：1×10⁶ / PBS + GFR Matrigel 1:1。Shafie：完整卵巢裸鼠 2×10⁶ 可成瘤，去势即使 20×10⁶ 也不成瘤。必看脂肪垫 JoVE，不能替代术者培训。不要套用 MDA-MB-231 的 2×10⁶ / 100 μL / 25% 基质。
仅供科研（RUO）。必须 IACUC 与 SPF。细胞数/体积/麻醉以本协议化合物卡和 PMID 为准，禁止照搬 MDA-MB-231。批件可覆盖文献麻醉数字。不替代兽医 SOP。
用途一览
只要局部原位成瘤/内分泌药效请走本页；皮下 6×10⁶ 与他莫昔芬耐药 5×10⁶ 都不是本 SOP 默认。
流程是否一致
原位内分泌药效共用本页接种骨架；耐药模型换细胞数与宿主方案。
| 用途 | 与傻瓜流程关系 | 相对核心 SOP 的差异 |
|---|---|---|
| ER+ 原位药效 | 共用核心 SOP | 即本页 Dall 1×10⁶。 |
| 他莫昔芬耐药 | 核心 + 附加模块 | Gutierrez 用 5×10⁶ + 去势/丸；入组后换药，不是改针法。 |
| 皮下 CDX | 换路径 / 协议 | Kang 6×10⁶ / Matrigel，不是脂肪垫。 |
宿主规格：性别 × 品系 × 雌激素
本 SOP 默认雌性裸鼠第 4 垫。完整卵巢 vs 去势必须与丸剂写进批件。不要把 MDA-MB-231 原位细胞数混过来。RUO。
| 研究场景 / 癌种语境 | 性别 | 品系 / 宿主 | 说明 |
|---|---|---|---|
| 本 SOP 默认：原位成瘤 / 内分泌药效 | 雌性（必须） | 裸鼠 nu/nu；完整卵巢 + 批件规格丸（Dall） | 1×10⁶ / GFR Matrigel 1:1，第 4 垫[1]。0.72 mg 级 IRA 丸可致泌尿感染；Dall 用 0.3–0.5 mg 硅胶丸。只补一周不够。 |
| 去势 + 丸（经典内分泌模型） | 雌性 | 裸鼠；去势 | Shafie：去势无丸即使 20×10⁶ 也不成瘤；接种当日肩胛间皮下放丸可恢复成瘤[2]。Osborne：去势无雌激素不成瘤，完整卵巢生长常很弱[3]。 |
| 他莫昔芬耐药随访 | 雌性 | 去势裸鼠 + 0.25 mg 级丸（Gutierrez） | 脂肪垫 5×10⁶[4]。不要把该文细胞数当成 Dall 默认。 |
| 雄性 | 不推荐 | — | 脂肪垫模型以雌性为准。 |
一句话造模
伦理 + 雌激素方案 → 扩培 → 第 4 脂肪垫接种 → 测瘤径 → 可选给药 → 终点病理。
D−1 / D0 时间轴
1. D−7 至 D−3
检疫；核对性别/品系/终点与 IACUC。
2. D−1
换液，80–90% 汇合。
3. D0
按配方卡接种（约 1×10⁶ / PBS + GFR Matrigel 1:1（Dall）；体积按批件，非默认 100 μL）。
4. 此后
按监测表；触发终点则停。
流程概览
以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。
- 伦理批件 + 雌性免疫缺陷鼠检疫
- STR/支原体合格；扩培 MCF-7
- 按批件植入雌激素丸（背侧；接种前或当日）
- 消化计数（活力 ≥90%）
- PBS + GFR Matrigel 1:1；约 1×10⁶（Dall）
- 麻醉后按 JoVE 暴露第 4 脂肪垫，缓慢注射至鼓起
- 闭合保温；每周测瘤径与体重
- 达预定体积后可选内分泌给药
- 终点原位病理
新手操作包（文献案例）
流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。
开箱清单（按每只鼠规划）
有货号的链到本站产品。培养基以 MC-h129 说明书为准。Matrigel 仅当化合物卡列出。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。[1]
| 物品 | 每只鼠 / 本研究 | 说明 |
|---|---|---|
| MCF-7 细胞 MC-h129 | 1 支起扩 | STR / 支原体合格；记代次 |
| 胎牛血清 FBS MC100 | 完全培养液按说明书 | 优先常规级 |
| 无钙镁 PBS / 无血清培养液 | 重悬；体积见配方卡 | 按 SOP |
| T75 或 10 cm 皿 | 见扩培表 | 对数期收获；T75 产量按约 5×10⁶ 规划，非该株测定 |
| Matrigel（仅当本协议使用） | 按化合物卡 | 冰上；未写则不要加 |
| 注射器 / 针 | 每只 1 支 + 备用 | 规格见接种核对卡与原文 |
| 外源雌激素（丸剂/缓释，按批件） | 接种前或当日植入（背侧皮下，远离接种点） | Dall：完整卵巢+低剂量丸可成瘤；0.72 mg 级 IRA 丸可致泌尿感染。Kang：1.7 mg 级 60 天丸死亡率高（膀胱结石/肾损伤）。只补一周不够（Dall）。毫克数不是默认可抄剂量。 |
扩培案例：只数 vs T75
按本协议出现的最高细胞数 5e+6 规划；死腔倍数 ×1.5。不要套用 MDA-MB-231 原位 2×10⁶ 公式。
| 动物（只） | T75（瓶） |
|---|---|
| 1 | 2 |
| 2 | 3 |
| 3 | 5 |
| 4 | 6 |
| 5 | 8 |
| 6 | 9 |
| 7 | 11 |
| 8 | 12 |
| 9 | 14 |
| 10 | 15 |
接种配方卡
本 SOP 剂量字符串：约 1×10⁶ / PBS + GFR Matrigel 1:1（Dall）；体积按批件，非默认 100 μL。整批按只数 ×1.5 补偿死腔，打一只吸一只。[1]
| 项目 | 本 SOP | 注意 |
|---|---|---|
| 细胞数 / 体积 | 约 1×10⁶ / PBS + GFR Matrigel 1:1（Dall）；体积按批件，非默认 100 μL | 以原文 Methods 为准，预实验 n=3–5 |
| 基质 | 仅当化合物卡列出 | 勿从别的株抄 1:1 或 25% |
| 时间窗 | 冰上，尽快打完（常 30–60 min） | 超时重悬或弃用 |
| 活力 | ≥90% 单细胞 | 低于 90% 或有团块：不注射 |
接种 / 手术核对卡
第 4 乳腺脂肪垫，不是侧腹皮下。必看该株 JoVE/文献。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。
| 核对项 | 通过 | 失败时 |
|---|---|---|
| 标志 | 第 4 乳头 / 脂肪垫 | 打成皮下皮丘：该点失败 |
| 推注 | 缓慢至局部鼓起，防漏 | 立即漏液：该点失败 |
| 空气 / 团块 | 排气；镜下单细胞 | 有团块：不注射 |
细胞培养卡（MCF-7 / MC-h129）
倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
以本站说明书为准。汇合度 = 贴壁面积百分比；示意图非真实显微照片。[1]
| 项目 | 做法 |
|---|---|
| 培养基 | 说明书优先（MC-h129）。体内接种前按该株习惯换液。 |
| 汇合 80–90%（收获） | 几乎铺满仍有细小空隙，勿层层叠加。过稀产量不够；长满后活力下降，不宜接种。 |
| 代次 | 体内固定低–中代次窗口并记录；标记株须验证表型。 |
| 接种日前一天 | 换液；镜检形态；按只数备 T75。 |
成功标准（预期，非承诺）
动力学因品系、代次、细胞数而异，须预实验。达不到时先查失败排查，不要盲目加细胞。[1]
| 时间点 | 常见表现 |
|---|---|
| 接种当日 | 局部鼓起；无持续漏液；复苏后活动可 |
| 随访窗 | 原位瘤体积、体重、泌尿相关体征、病理；可选激素相关标志物。 |
| 成瘤/定植率 | 批次会变；预实验 n≈3–5 |
失败排查
涉及动物福利的立即按批件执行，不要在网页上临时加剂量或麻醉浓度。
| 现象 | 常见原因 | 处理 |
|---|---|---|
| 悬液团块 / 堵针 | 消化不全或胶凝固 | 不注射；回冰或弃管 |
| 路径失败体征 | 漏液或打错层次 | 该只退出主分析；对照核对卡 |
| 窗口内无读出 | 假注射、细胞不活、剂量/宿主不符 | 先核对记录与原文，勿照搬其他株加量 |
| 体重骤降 / 呼吸差 / 溃疡 | 负荷或手术并发症 | 立即人道终点 |
监测记录字段
体积 ≈ 长 × 宽² / 2。溃疡与体重优先于「再等几天」。
| 字段 | 如何记 |
|---|---|
| 日期 / D0 | 接种日 |
| 鼠号 / 组别 / 代次 | 随机后锁定 |
| 路径是否成功 | 是 / 否（失败原因） |
| 体重 (g) | 与观察同一天；骤降触发终点 |
| 瘤径 | L、W；体积 ≈ L×W²/2 |
文献案例对照
T75 按 5×10⁶ 保守备瓶（Gutierrez 上限）；本 SOP 注射 Dall 1×10⁶。JoVE 是手术视频。Price 1990 是 MDA-MB-231/435，未列入。
| 文献 | 年份 | 期刊 | 用法 |
|---|---|---|---|
| Dall 2015[1] | 裸鼠 / NOD-SCID，第 4 垫，完整卵巢 | 1×10⁶ PBS + GFR Matrigel 1:1 | 0.3–0.5 mg 硅胶丸可成瘤；0.72 mg IRA 可致泌尿感染；只补一周不够。未写 μL |
| Shafie 1981[2] | 完整 vs 去势 BALB/c 裸鼠脂肪垫 | 2×10⁶ 对数期；去势即使用 20×10⁶ 也不成瘤 | 接种当日肩胛间放雌二醇丸可恢复。未写 Matrigel |
| Osborne 1985[3] | BALB/c 裸鼠 ± 去势 | 摘要未给接种细胞数 | 生长依赖雌激素；丸剂 0.01–0.5 mg 级剂量依赖；撤丸停滞。不是 231 剂量 |
| Gutierrez 2005[4] | 去势裸鼠脂肪垫，他莫昔芬耐药模型 | 5×10⁶ | 0.25 mg 级丸。不是本 SOP 默认 1×10⁶；药物剂量只按批件 |
| Kocatürk JoVE 2015[5] | NSG 等脂肪垫手术视频 | 示例 5×10⁵ | 手术方法，不是 MCF-7 剂量 |
| Soule 1973[6] | 株建立 | JNCI | 鉴定，不是接种 SOP |
| Osborne 1987[7] | 多来源 MCF-7 | 成瘤/激素反应不同 | 必须 STR；勿混批 |
- 01【伦理】IACUC；雌性免疫缺陷鼠。RUO。Dall/JoVE 未给麻醉 mg/%；需要制动时按批件。写明溃疡、体重与泌尿相关终点（Dall：0.72 mg 级丸可致泌尿感染；Kang 高剂量丸可致膀胱结石）[1]。
- 02
- 03【细胞】MCF-7（MC-h129），85–90% 汇合，活力 ≥90%。STR 核对来源（Osborne 1987）[7]。本 SOP 约 1×10⁶ / PBS + GFR Matrigel 1:1（Dall）[1]。Shafie 完整卵巢脂肪垫为 2×10⁶（未写 Matrigel）[2]。Gutierrez 耐药模型为 5×10⁶[4]。不要默认为 MDA-MB-231 的 2×10⁶，也不要把 Kang 皮下 6×10⁶ 抄进垫内。体积按批件，Dall 未写 μL，不要默认为 100 μL。培养：说明书优先；Dall 用 DMEM + 10% FBS + 胰岛素 10 μg/mL[1]。铺路石上皮，不要用 231 梭形的「看起来很稀」当汇合标准。
- 04【手术】按 JoVE 暴露第 4 脂肪垫，缓慢注射至鼓起，闭合保温[5]。JoVE 示例 5×10⁵ 不是 MCF-7 剂量。
- 05
- 06【终点】原位瘤病理。不以自发转移为成功标准。内分泌治疗微克数只按批件，不要从 Gutierrez 网页摘抄他莫昔芬剂量。
试剂 / 材料
| 名称 | 用途 | 浓度 / 用量 |
|---|---|---|
| MCF-7 细胞（MC-h129） | 接种细胞 | 约 1×10⁶ / PBS + GFR Matrigel 1:1（Dall）；体积按批件，非默认 100 μL |
| Matrigel（常用） | 助植 | 常 1:1，按 SOP |
| 外源雌激素（缓释丸 / 批件规格） | 支持 ER+ 成瘤 | 规格只来自 IACUC。文献对照：Dall 完整卵巢+0.3–0.5 mg 硅胶丸；Kang 0.18 mg 级仍可支持皮下成瘤。不要把网页毫克数当唯一正确。 |
| 麻醉剂 / 镇痛药 | 手术与福利 | 文献有 mg/% 则写在该协议化合物卡；批件可覆盖 |
| 受试药物 / 溶剂对照（可选） | 治疗臂 | 按药理方案 |
读出指标
原位瘤体积、体重、泌尿相关体征、病理；可选激素相关标志物。
参考文献（PubMed）
- [1]PMID 26640593 — Low Dose, Low Cost Estradiol Pellets Can Support MCF-7 Tumour Growth in Nude Mice without Bladder Symptoms. J Cancer (2015)
- [2]PMID 6265682 — Role of hormones in the growth and regression of human breast cancer cells (MCF-7) transplanted into athymic nude mice. J Natl Cancer Inst (1981)
- [3]PMID 3967234 — Effect of estrogens and antiestrogens on growth of human breast cancer cells in athymic nude mice. Cancer Res (1985)
- [4]PMID 15753463 — Molecular changes in tamoxifen-resistant breast cancer: relationship between estrogen receptor, HER-2, and p38 mitogen-activated protein kinase. J Clin Oncol (2005)
- [5]PMID 25742185 — Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. J Vis Exp (2015)
- [6]PMID 4357757 — A human cell line from a pleural effusion derived from a breast carcinoma. J Natl Cancer Inst (1973)
- [7]PMID 3620713 — Biological differences among MCF-7 human breast cancer cell lines from different laboratories. Breast Cancer Res Treat (1987)
免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。