适用场景
裸鼠单侧背叶（DP）显微镜下注射亲本 LNCaP，建立 AR+ 原位瘤。本 SOP 取 Liu：1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% Matrigel；3% 异氟烷，0.8 L/min 诱导。Sato：同细胞数原位，SCID 成瘤 89%，12 周淋巴结 100%、肺微转移 40%（n=10）。不是 PC-3 前叶 50 μL 无胶，也不是 231 的 2×10⁶ / 100 μL。Wang 是瘤块 SOI，不是本针。
仅供科研（RUO）。必须 IACUC 与 SPF。细胞数/体积/麻醉以本协议化合物卡和 PMID 为准，禁止照搬 MDA-MB-231。批件可覆盖文献麻醉数字。不替代兽医 SOP。
用途一览
只要背叶原位局部生长与该文/Sato 播散谱请走本页。皮下测径、SOI 瘤块、C4-2 骨模型都不是本针。
| 用途 | 适合度 | 主要读出 | 说明 |
|---|---|---|---|
| 背叶原位 + 可选淋巴结/肺播散 | 推荐 | 原位瘤（超声）、PSA、淋巴结/肺病理[1][2] | Liu：裸鼠单侧 DP，1×10⁶ / 20 μL 50% 胶，8 周成瘤 65%（13/20）[1]。Sato：SCID 原位 89%；12 周腹膜后/纵隔淋巴结 100%，肺微转移 40%[2]。 |
| 皮下瘤块原位缝合（SOI） | 慎用 | 该文淋巴结 61%、肺 44% | Wang：完整组织块缝腹侧叶，不是细胞悬液 20 μL[3]。Liu 明确反对用皮下微环境的瘤块代表原位。 |
| 皮下测径 / PC-3 前叶 / 胫骨 | 不推荐 | — | 皮下见另一协议。不要抄 PC-3 前叶 50 μL 无胶。骨转移默认走 C4-2，不是亲本[4]。 |
流程是否一致
背叶原位共用本页显微镜注射骨架；SOI 与皮下都换协议。
| 用途 | 与傻瓜流程关系 | 相对核心 SOP 的差异 |
|---|---|---|
| 背叶原位 | 共用核心 SOP | 即本页 Liu 1×10⁶ / 20 μL。 |
| SOI 瘤块 | 换路径 / 协议 | 先皮下成瘤再缝前列腺，不是微量注射。 |
| 皮下 CDX | 换路径 / 协议 | Lim 0.25 mL 胶，不是 20 μL 背叶。 |
一句话造模
伦理 → 扩培 → 显微镜下背叶注射 → 超声/PSA 随访 → 终点多器官病理。
D−1 / D0 时间轴
1. D−7 至 D−3
检疫；核对性别/品系/终点与 IACUC。
2. D−1
换液，80–90% 汇合。
3. D0
按配方卡接种（Liu：1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% Matrigel（单侧背叶）。Sato 对照 1×10⁶ 原位（摘要未写 μL））。
4. 此后
按监测表；触发终点则停。
流程概览
以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。
- 伦理批件 + 雄性裸鼠/SCID 检疫
- STR 合格；扩培亲本 LNCaP
- 1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% Matrigel
- 3% 异氟烷，0.8 L/min 诱导（Liu）
- 下腹横切口；膀胱留在腹腔；棉球固定精囊暴露 DP
- Hamilton 33G 缓慢注入至小水疱
- 超声随访；体重/排尿
- 终点：前列腺 + 淋巴结/肺病理
新手操作包（文献案例）
流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。
开箱清单（按每只鼠规划）
有货号的链到本站产品。培养基以 MC-h125 说明书为准。Matrigel 仅当化合物卡列出。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。[1]
| 物品 | 每只鼠 / 本研究 | 说明 |
|---|---|---|
| LNCaP 细胞 MC-h125 | 1 支起扩 | STR / 支原体合格；记代次 |
| 胎牛血清 FBS MC100 | 完全培养液按说明书 | 优先常规级 |
| 无钙镁 PBS / 无血清培养液 | 重悬；体积见配方卡 | 按 SOP |
| T75 或 10 cm 皿 | 见扩培表 | 对数期收获；T75 产量按约 5×10⁶ 规划，非该株测定 |
| Matrigel（仅当本协议使用） | 按化合物卡 | 冰上；未写则不要加 |
| 注射器 / 针 | 每只 1 支 + 备用 | 规格见接种核对卡与原文 |
扩培案例：只数 vs T75
按本协议出现的最高细胞数 1e+6 规划；死腔倍数 ×1.2。不要套用 MDA-MB-231 原位 2×10⁶ 公式。
| 动物（只） | T75（瓶） |
|---|---|
| 1 | 1 |
| 2 | 1 |
| 3 | 1 |
| 4 | 1 |
| 5 | 2 |
| 6 | 2 |
| 7 | 2 |
| 8 | 2 |
| 9 | 3 |
| 10 | 3 |
接种配方卡
本 SOP 剂量字符串：Liu：1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% Matrigel（单侧背叶）。Sato 对照 1×10⁶ 原位（摘要未写 μL）。整批按只数 ×1.2 补偿死腔，打一只吸一只。[1]
| 项目 | 本 SOP | 注意 |
|---|---|---|
| 细胞数 / 体积 | Liu：1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% Matrigel（单侧背叶）。Sato 对照 1×10⁶ 原位（摘要未写 μL） | 以原文 Methods 为准，预实验 n=3–5 |
| 基质 | 仅当化合物卡列出 | 勿从别的株抄 1:1 或 25% |
| 时间窗 | 冰上，尽快打完（常 30–60 min） | 超时重悬或弃用 |
| 活力 | ≥90% 单细胞 | 低于 90% 或有团块：不注射 |
接种 / 手术核对卡
按该株已发表路径操作，勿照搬其他株。麻醉见化合物卡/PMID，批件可覆盖。
| 核对项 | 通过 | 失败时 |
|---|---|---|
| 路径 | 与名称/批件一致 | 拿不准：先查 PMID，不要猜 |
| 空气 / 团块 | 排气；镜下单细胞 | 有团块：不注射 |
细胞培养卡（LNCaP / MC-h125）
倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
以本站说明书为准。汇合度 = 贴壁面积百分比；示意图非真实显微照片。[1]
| 项目 | 做法 |
|---|---|
| 培养基 | 说明书优先（MC-h125）。体内接种前按该株习惯换液。 |
| 汇合 80–90%（收获） | 几乎铺满仍有细小空隙，勿层层叠加。过稀产量不够；长满后活力下降，不宜接种。 |
| 代次 | 体内固定低–中代次窗口并记录；标记株须验证表型。 |
| 接种日前一天 | 换液；镜检形态；按只数备 T75。 |
成功标准（预期，非承诺）
动力学因品系、代次、细胞数而异，须预实验。达不到时先查失败排查，不要盲目加细胞。[1]
| 时间点 | 常见表现 |
|---|---|
| 接种当日 | 路径核对通过；复苏后活动可 |
| 随访窗 | 原位瘤（超声）、血清 PSA、淋巴结/肺病理、体重。 |
| 成瘤/定植率 | 批次会变；预实验 n≈3–5 |
失败排查
涉及动物福利的立即按批件执行，不要在网页上临时加剂量或麻醉浓度。
| 现象 | 常见原因 | 处理 |
|---|---|---|
| 悬液团块 / 堵针 | 消化不全或胶凝固 | 不注射；回冰或弃管 |
| 路径失败体征 | 漏液或打错层次 | 该只退出主分析；对照核对卡 |
| 窗口内无读出 | 假注射、细胞不活、剂量/宿主不符 | 先核对记录与原文，勿照搬其他株加量 |
| 体重骤降 / 呼吸差 / 溃疡 | 负荷或手术并发症 | 立即人道终点 |
监测记录字段
本路径往往不测皮下瘤径。体重与批件终点优先于影像。
| 字段 | 如何记 |
|---|---|
| 日期 / D0 | 接种日 |
| 鼠号 / 组别 / 代次 | 随机后锁定 |
| 路径是否成功 | 是 / 否（失败原因） |
| 体重 (g) | 与观察同一天；骤降触发终点 |
| 读出 | 原位瘤（超声）、血清 PSA、淋巴结/肺病理、体重。 |
文献案例对照
T75 按 Liu/Sato 1×10⁶ 规划。20 μL 不是 0.25 mL，也不是 PC-3 的 50 μL。
| 文献 | 年份 | 期刊 | 用法 |
|---|---|---|---|
| Liu 2022[1] | 裸鼠单侧背叶（显微镜） | 1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% 胶 | 3% 异氟烷 0.8 L/min。8 周成瘤 65%。33G Hamilton |
| Sato 1997[2] | SCID 原位前列腺 | 1×10⁶（摘要未写 μL） | 成瘤 89%；12 周淋巴结 100%、肺微转移 40%（n=10）。去势后 PSA 谷约 d4 |
| Wang 1999[3] | 对照：SOI 瘤块 | 腹侧叶组织块 | 18/20 成瘤；淋巴结 61%、肺 44%。不是 20 μL 悬液 |
| Thalmann 2000[4] | 对照：C4-2 骨转移 | 去势宿主 | 衍生株 ≠ 亲本原位 SOP |
| Stephenson 1992[5] | LNCaP-FGC 原位 vs 皮下 | JNCI | 无胶时只在前列腺成瘤。摘要无细胞数；PC-3M 转移率不可抄 |
| Horoszewicz 1983[6] | 株建立 | Cancer Res | 鉴定，不是原位体积 |
| Lim 1993[7] | 对照：皮下 + 0.25 mL 胶 | 1×10⁶ | 路径不同不可抄体积 |
- 01【伦理】IACUC；雄性裸鼠/SCID SPF。RUO。Liu：3% 异氟烷诱导，0.8 L/min；术中保温。批件可覆盖。写明体重、排尿相关终点。漏入腹腔会造成人为种植。
- 02
- 03【手术】下腹约 1.5 cm 横切口。膀胱留在腹腔（外置可拉伤耻骨尿道韧带致尿失禁）。棉球后移并固定精囊暴露 DP；不要用显微镊夹破精囊。Hamilton 尖斜面 33G，约平行于 DP 长轴，缓慢注入至小水疱；拔针后棉球压针孔防漏。不是腹叶、不是前叶、不是 0.25 mL 皮下。
- 04
- 05【终点】前列腺、淋巴结、肺。Sato n=10：淋巴结 100%，肺微转移 40%[2]。腹腔漏种不是 cascade 成功。骨转移不是亲本默认终点。
试剂 / 材料
| 名称 | 用途 | 浓度 / 用量 |
|---|---|---|
| LNCaP 细胞（MC-h125） | 接种细胞 | Liu：1×10⁶ / 20 μL PBS + 50% Matrigel（单侧背叶）。Sato 对照 1×10⁶ 原位（摘要未写 μL） |
| Matrigel（常用） | 助植 | Liu 50%，总注射 20 μL。不是 Lim 皮下 0.25 mL |
| 麻醉剂 / 镇痛药 | 手术与福利 | Liu：3% 异氟烷诱导，0.8 L/min。Sato 未给麻醉数字。批件可覆盖 |
| 受试药物 / 溶剂对照（可选） | 治疗臂 | 按药理方案 |
读出指标
原位瘤（超声）、血清 PSA、淋巴结/肺病理、体重。
参考文献（PubMed）
- [1]PMID 35168543 — Establishment of an orthotopic prostate cancer xenograft mouse model using microscope-guided orthotopic injection of LNCaP cells into the dorsal lobe of the mouse prostate. BMC Cancer (2022)
- [2]PMID 9108464 — A metastatic and androgen-sensitive human prostate cancer model using intraprostatic inoculation of LNCaP cells in SCID mice. Cancer Res (1997)
- [3]PMID 10334107 — High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP. Prostate (1999)
- [4]PMID 10881018 — LNCaP progression model of human prostate cancer: androgen-independence and osseous metastasis. Prostate (2000)
- [5]PMID 1378502 — Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice. J Natl Cancer Inst (1992)
- [6]PMID 6831420 — LNCaP model of human prostatic carcinoma. Cancer Res (1983)
- [7]PMID 7681204 — Growth of an androgen-sensitive human prostate cancer cell line, LNCaP, in nude mice. Prostate (1993)
免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。