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MDA-MB-231 脑转移模型

三阴性乳腺癌 · MC-h133

适用场景

默认用 231-BR 左心室注射（Yoneda 1×10⁵ 或 Zhou 约 1.75–2×10⁵ / 100 μL）建立多灶脑转移。颈动脉用 Liu PDX 手法（1×10⁵ / 50 μL），不是 MDA-231 默认剂量。颅内 1–2 μL 只评局部生长。必看 JoVE，不能替代术者培训。

细胞货号：MC-h133 · 产品造模页 · 体外球体

仅供科研（RUO）。必须 IACUC、SPF 与左心/显微外科培训。本页不提供麻醉剂量，不替代 JoVE 与兽医 SOP。禁止 Matrigel。无鲜红回血不要推注。BR 不要拿到骨转移页用。

Zhou JoVE：超声引导左心建立 231-BR 脑转移（含视频） · PMID 24637963

用途一览

要血行过 BBB 的脑定植走左心 BR（默认）或颈动脉；要局部颅内生长走立体定向；不要把 BO/骨页 SOP 套过来。

用途适合度主要读出说明
实验性 BCBM（血行）推荐MRI 灶数/体积、神经体征、全脑病理[1][2][4]231-BR；1–2×10⁵ / 100 μL；♀ 裸鼠。
过 BBB 的颈动脉定植可用脑定植 ± 减少体循环漏种[3]Liu 是 PDX/SCID 1×10⁵ / 50 μL，须预实验才能套到 231-BR。
颅内局部生长或完整 cascade不推荐颅内路径跳过循环；cascade 请换原位后自发转移颅内可做微环境药筛，但不要写成转移模型。

流程是否一致

BR 左心是本页傻瓜骨架；颈动脉/颅内换核对卡；骨请换 BO 页。

用途与傻瓜流程关系相对核心 SOP 的差异
实验性 BCBM共用核心 SOP即本页左心。
颈动脉核心 + 附加模块50 μL 显微外科，不是 100 μL。
颅内 / 原位自发 / 骨换路径 / 协议实质种植、脂肪垫或 BO 左心。

宿主规格

左心默认雌性裸鼠。Yoneda 4 周；Zhou 6–8 周[1][2][4]。颈动脉 Liu 为 SCID ~8 周[3]。雄性不作为默认。

研究场景 / 癌种语境性别品系 / 宿主说明
本 SOP 默认（左心 BR）雌性裸鼠 6–8 周（亦可 4 周）1–2×10⁵ / 100 μL。
颈动脉 PDX 手法雌性SCID ~8 周[[3]]不要把该宿主/剂量默认为 231-BR。
雄性不作为默认—上列 SOP 均为雌性。

一句话造模

伦理批件 → 扩培 BR → 左心（默认）或颈动脉/颅内 → MRI/体征 → 全脑病理。

D−1 / D0 时间轴

  1. 1. D−7 至 D−3

    雌性裸鼠检疫；写明神经体征终点。

  2. 2. D−1

    换液，约 80% 汇合[[4]]。

  3. 3. D0

    BR 1–2×10⁵ / 100 μL → 左心（或按路径卡换颈动脉/颅内）。

  4. 4. D+21 起

    MRI/神经体征；约 3 周看 T2。

流程概览

以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。

  1. 伦理批件 + 神经体征终点
  2. 扩培 231-BR（记代次；T75 见扩培表）
  3. 单细胞悬液（无 Matrigel）
  4. 麻醉后左心室注射 BR（鲜红回血，100 μL）
  5. MRI 或 BLI 随访
  6. 终点全脑病理

新手操作包（文献案例）

流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。

开箱清单（脑转移，按每只鼠规划）

默认是 231-BR 左心，不是骨转移页的 BO，也不是原位脂肪垫。禁止 Matrigel。麻醉剂量只来自批件。[1][2]

物品每只鼠 / 本研究说明
MDA-231BR（或亲本对照） MC-h1331 支起扩STR/支原体合格；BR 与亲本、BO 分开记代次[1]
FBS MC10010% 完全培养液常规级
无血清 DMEM 或冰 PBS100 μL/只（左心）Zhou PLOS：无血清培养液 100 μL[4]；Yoneda：0.1 mL PBS[1]
28G 胰岛素针（左心）每只 1 支Yoneda 28G；超声引导见 JoVE[1][2]
33G 弯针（仅颈动脉）按手术只数Liu PDX：CCA 注射，50 μL；不是 MDA-231 默认剂量[3]
微量注射器（仅颅内）1–2 μLLiu：1×10⁵ / 1–2 μL 纹状体；局部生长，不是 cascade[3]
MRI / 可选 BLI全研究共用T2 约 3 周可见多灶；增强另按影像 SOP[2][4]

扩培案例：只数 vs T75（按左心 2×10⁵ 备瓶）

按 Zhou PLOS 2×10⁵ / 100 μL + 20% 备瓶。Yoneda 1×10⁵ 更省；颅内 1×10⁵ / 1–2 μL 更省。不要套原位 2×10⁶。[1][4]

裸鼠（只）T75（瓶）
11
21
31
41
51
61
71
81
91
101

接种配方卡（按路径）

本 SOP 默认左心 231-BR。JoVE 写 1.75×10⁵；同组 PLOS 写 2×10⁵。颈动脉/颅内数字来自 Liu PDX，不能当 MDA-231 默认。[1][2][3][4]

路径本 SOP / 文献体积与载体
左心（默认）Yoneda 1×10⁵；Zhou JoVE 1.75×10⁵；PLOS 2×10⁵[1][2][4]100 μL PBS 或无血清培养液；禁止 Matrigel
颈内动脉Liu PDX：1×10⁵；雌性 SCID ~8 周[3]50 μL PBS；33G；约 2 min 推注。不是 100 μL 左心
颅内立体定向Liu：1×10⁵[3]1–2 μL PBS；右纹状体（前囟右 2 mm、深 2.5 mm）。局部生长
整批倍数（左心）只数 × 1.2胰岛素针死腔小于结核菌素；打一只吸一只

左心核对卡（231-BR，不是 BO）

骨转移页禁止用 BR。本页禁止用 BO。鲜红回血后才推。JoVE 用超声提高成功率。针管内气隙只用于看搏动，禁止把空气推进心室。[1][2]

核对项通过失败时
亚系231-BR / Br-GFP / Br-luc亲本效率低且颅外灶多；BO 走骨页[1]
回血鲜红搏动后缓慢 100 μL无回血不要推；勿反复盲穿[2]
引导有条件按 JoVE 超声[2]徒手成功率约 50%，反复穿刺增加死亡[2]
基质无 Matrigel基质会栓动脉

颈动脉核对卡（Liu 改良 ICA，PDX 手法）

剂量与宿主是 PDX/SCID，不是 MDA-231BR 默认。结扎 CCA 尾端 + ECA，细胞经 ICA 入脑。必看原文图 1，不能替代显微外科培训。本页不写麻醉剂量。[3]

核对项通过失败时
宿主Liu：雌性 SCID ~8 周[3]不要默认套裸鼠 4 周左心宿主
体积1×10⁵ / 50 μL PBS；33G 约 2 min[3]不要打 100 μL 左心体积
方向阻断向心脏回流，ECA 结扎减少面/耳漏种[3]面/耳成瘤=漏入 ECA 分布
解读过 BBB 的血行定植仍不是原位出瘤 cascade

颅内核对卡（立体定向，局部生长）

Liu：1×10⁵ / 1–2 μL，右纹状体。成瘤可靠，但不能外推归巢或过 BBB。[3]

核对项通过失败时
体积1–2 μL，缓慢打成 10 μL 会损伤/外溢
坐标前囟右 2 mm、深 2.5 mm[3]坐标错=脑室或脑膜外
模型含义颅内微环境生长要 cascade 换原位后自发；要血行换左心/颈动脉

细胞培养卡（MDA-MB-231 / MC-h133）

倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。

约 50%（过稀）
空隙大，产量不够，再养一天
85–90%（传代 / 收获）
几乎铺满，仍有细缝；未堆叠
约 100%（过密）
空隙消失，不宜接种
点击放大

Zhou：约 80% 汇合收获，无血清重悬[4]。示意图非真实显微照片。

项目做法
培养基说明书优先。Zhou：DMEM + 10% FBS[4]。
汇合80–90% 收获。过汇合降低体内潜能。
重悬左心：无血清培养液或 PBS，100 μL[1][4]。
亚系BR 与亲本分开；筛选后须再验证脑亲和[1]。

成功标准（预期，非承诺）

BR 左心后多灶脑转移；Zhou MRI 约 3 周 T2 可见，可小至约 310 μm。仍须查颅外。[1][2][4]

时间点表现
D0鲜红回血后复苏可；无即刻瘫痪
约 3 周T2 多灶高信号；早期增强可阴性（BTB 仍完整）[4]
约 5 周灶数增加；部分灶才增强[4]
Yoneda BR左心后几乎只脑，与 BO 只骨对照[1]

失败排查

抽搐、转圈、体重骤降按神经终点，不要为「再扫一张 MRI」拖延。

现象原因处理
即刻死亡 / 肺出血右心或空气停组；对照 JoVE，勿盲穿
3 周 MRI 阴性假注射、细胞不活、亚系错核对回血记录；不要盲目加到骨页剂量
面/耳包块（颈动脉）ECA 分布该只偏离脑模型[3]
单一巨大颅内灶（颅内路径）局部种植，不是转移不要写成 BCBM cascade

监测记录字段

神经体征优先于影像。本页不测皮下瘤径。

字段如何记
路径 / 亚系左心 BR vs 颈动脉 vs 颅内
回血 / 手术是否成功是 / 否
体重 / 转圈 / 抽搐触发终点则停
MRI 周次T2 灶数；增强是否出现[4]
颅外肺/骨/肾上腺（亲本尤其要记）[1]

文献案例对照

左心数字来自 231-BR；颈动脉/颅内来自 PDX。点击 PMID 看 JoVE。

文献宿主细胞手法读出
Yoneda 2001[1]♀ 裸鼠 4 周BR 1×10⁵ / 0.1 mL PBS；28G左心，鲜红回血BR 几乎只脑；BO 只骨；亲本骨 ± 内脏/脑
Zhou JoVE 2014[2]♀ 裸鼠 6–8 周231-BR-GFP 1.75×10⁵ / 100 μL 无血清超声引导左心MRI 约 3 周多灶；徒手成功率约 50%
Liu 2019[3]♀ SCID ~8 周PDX 1×10⁵ICA 50 μL 或颅内 1–2 μL过 BBB vs 局部生长；不是 MDA-231 默认剂量
Zhou PLOS 2013[4]♀ 裸鼠 6–8 周231-BR 2×10⁵ / 100 μL 无血清超声引导左心周 3 T2 可见；周 5 部分增强。文中麻醉剂量不抄到本页
  1. 01
    【伦理】IACUC；抽搐、转圈、体重骤降人道终点。左心/显微外科培训。RUO。必看 Zhou JoVE[2]。本页不写麻醉剂量（PLOS 中的吸入浓度不要抄到网页）。

    默认是 231-BR 左心，不是骨转移页的 BO，也不是原位脂肪垫。禁止 Matrigel。麻醉剂量只来自批件。[1][2]

    物品每只鼠 / 本研究说明
    MDA-231BR（或亲本对照） MC-h1331 支起扩STR/支原体合格；BR 与亲本、BO 分开记代次[1]
    FBS MC10010% 完全培养液常规级
    无血清 DMEM 或冰 PBS100 μL/只（左心）Zhou PLOS：无血清培养液 100 μL[4]；Yoneda：0.1 mL PBS[1]
    28G 胰岛素针（左心）每只 1 支Yoneda 28G；超声引导见 JoVE[1][2]
    33G 弯针（仅颈动脉）按手术只数Liu PDX：CCA 注射，50 μL；不是 MDA-231 默认剂量[3]
    微量注射器（仅颅内）1–2 μLLiu：1×10⁵ / 1–2 μL 纹状体；局部生长，不是 cascade[3]
    MRI / 可选 BLI全研究共用T2 约 3 周可见多灶；增强另按影像 SOP[2][4]
  2. 02
    【细胞】231-BR；D−1 换液；约 80% 汇合。左心 1–2×10⁵ / 100 μL 无血清培养液或 PBS，无 Matrigel。30 min 内打完[1][2][4]。
  3. 03
    【左心】28G；鲜红搏动回血后缓慢 100 μL。有条件超声引导。针管内气隙只用于看搏动，禁止把空气推进心室[1][2]。
  4. 04
    【颈动脉】仅当实验需要过 BBB 且术者已培训：Liu 1×10⁵ / 50 μL PBS，33G，约 2 min；该数字来自 PDX，须预实验[3]。
  5. 05
    【颅内】1×10⁵ / 1–2 μL 纹状体只评局部生长，不要写成转移 cascade[3]。

    Liu：1×10⁵ / 1–2 μL，右纹状体。成瘤可靠，但不能外推归巢或过 BBB。[3]

    核对项通过失败时
    体积1–2 μL，缓慢打成 10 μL 会损伤/外溢
    坐标前囟右 2 mm、深 2.5 mm[3]坐标错=脑室或脑膜外
    模型含义颅内微环境生长要 cascade 换原位后自发；要血行换左心/颈动脉
  6. 06
    【监测】体重与神经体征；约 3 周 MRI。Zhou 仍可见肺/骨等颅外灶，须记录[2]。

    神经体征优先于影像。本页不测皮下瘤径。

    字段如何记
    路径 / 亚系左心 BR vs 颈动脉 vs 颅内
    回血 / 手术是否成功是 / 否
    体重 / 转圈 / 抽搐触发终点则停
    MRI 周次T2 灶数；增强是否出现[4]
    颅外肺/骨/肾上腺（亲本尤其要记）[1]

    抽搐、转圈、体重骤降按神经终点，不要为「再扫一张 MRI」拖延。

    现象原因处理
    即刻死亡 / 肺出血右心或空气停组；对照 JoVE，勿盲穿
    3 周 MRI 阴性假注射、细胞不活、亚系错核对回血记录；不要盲目加到骨页剂量
    面/耳包块（颈动脉）ECA 分布该只偏离脑模型[3]
    单一巨大颅内灶（颅内路径）局部种植，不是转移不要写成 BCBM cascade
  7. 07
    【终点】全脑连续切片；亲本/非 BR 须查颅外。
  8. 08
    【质控】固定亚系来源与代次；独立重复。BR 不要拿到骨页。

试剂 / 材料

名称用途浓度 / 用量
MDA-231BR（脑亲和亚系）左心脑转移接种1–2×10⁵ / 100 μL 无血清培养液或 PBS[[1]][[2]][[4]]
MRI 对比剂（可选）后期 BTB 通透按影像 SOP；早期灶可增强阴性[[4]]
麻醉剂 / 镇痛药手术与福利按伦理批件与兽医 SOP
受试药物 / 溶剂对照（可选）治疗臂按药理方案

读出指标

脑灶数/体积、MRI/BLI、神经体征、全脑病理、可选颅外转移。

参考文献（PubMed）

  1. [1]PMID 11499871 — A bone-seeking clone exhibits different biological properties from the MDA-MB-231 parental human breast cancer cells and a brain-seeking clone in vivo and in vitro. J Bone Miner Res (2001)
  2. [2]PMID 24637963 — Ultrasound imaging-guided intracardiac injection to develop a mouse model of breast cancer brain metastases followed by longitudinal MRI. J Vis Exp (2014)
  3. [3]PMID 30679540 — Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method. Sci Rep (2019)
  4. [4]PMID 23638013 — Longitudinal MRI evaluation of intracranial development and vascular characteristics of breast cancer brain metastases in a mouse model. PLoS One (2013)

免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。

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