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MDA-MB-231 胫骨内接种骨模型

三阴性乳腺癌 · MC-h133

适用场景

将 2.5×10⁵ 细胞 / 10 μL 注入近端胫骨髓腔，模拟已定植后的溶骨与骨微环境，不覆盖血行归巢。对侧常打 PBS。必看 JoVE，不能替代手术培训。

细胞货号：MC-h133 · 产品造模页 · 体外球体

仅供科研（RUO）。IACUC、无菌手术与镇痛按批件。本页不写麻醉剂量。必看 JoVE 胫骨段。不是左心 SOP。

Campbell JoVE：胫骨内接种（与左心同一视频） · PMID 22972196

用途一览

局部骨破坏/骨靶向药走本页；要归巢请换左心；不要把 100 μL 左心体积套到髓腔。

用途适合度主要读出说明
定植后骨破坏 / 局部治疗推荐接种侧 μCT/TRAP vs PBS 侧[1][2]2.5×10⁵ / 10 μL；1–3 周。
血行归巢或完整 cascade不推荐本 SOP 跳过循环换左心或原位后自发转移。

流程是否一致

局部溶骨即本页；归巢换左心。

用途与傻瓜流程关系相对核心 SOP 的差异
定植后骨破坏共用核心 SOP即本页。
实验性骨转移（含归巢）换路径 / 协议左心室，100 μL，不是 10 μL。

宿主规格

与左心相同：雌性裸鼠 4–6 周为主[1][2]。

研究场景 / 癌种语境性别品系 / 宿主说明
本 SOP 默认雌性裸鼠 4–6 周一侧细胞、一侧 PBS。
雄性不作为默认—须批件说明。

一句话造模

伦理批件 → 细胞准备 → 胫骨钻孔/注射 → 影像与体征 → 终点骨病理。

D−1 / D0 时间轴

  1. 1. D−1

    换液，80–90% 汇合。

  2. 2. D0

    2.5×10⁵ / 10 μL → 一侧胫骨；对侧 PBS。

  3. 3. D+7 起

    跛行、体重、X 线。

流程概览

以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。

  1. 伦理批件 + 镇痛规范
  2. 扩培 MDA-MB-231（T75 见扩培表）
  3. 麻醉后经髌韧带入胫骨近端
  4. 髓腔注入 10 μL（对侧 PBS）
  5. X 线 / μCT 监测
  6. 终点组织学

新手操作包（文献案例）

流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。

开箱清单（胫骨内，按每只鼠规划）

髓腔局部接种，不是左心、不是尾静脉。必看同一篇 JoVE 的胫骨段。禁止 Matrigel。[1]

物品每只鼠 / 本研究说明
MDA-MB-231 MC-h1331 支起扩STR/支原体合格
FBS MC10010% 完全培养液常规级
PBS（冰上）10 μL/侧对侧常打 10 μL PBS 假手术[1]
28G ½″ 针每侧 1 支经髌韧带入近端胫骨；堵针则换针沿原道[1][2]
镇痛 / 无菌按批件本页不写剂量

扩培案例：只数 vs T75（胫骨 2.5×10⁵）

JoVE 2.5×10⁵ / 10 μL + 20%。10 只仍约 1 瓶 T75。不要套左心 100 μL 或原位 2×10⁶。[1]

裸鼠（只）T75（瓶）
11
21
31
41
51
61
71
81
91
101

接种配方卡（髓腔小体积）

JoVE：2.5×10⁵ / 10 μL 冰 PBS。对侧 10 μL PBS。[1]

项目本 SOP文献
细胞数2.5×10⁵ / 胫骨JoVE 250,000 / 10 μL[1]
体积10 μL（不是 100 μL）同 JoVE[1]
对侧10 μL PBS 假手术[1]自身对照
基质禁止 Matrigel文献未用
时间窗冰上 30 min[1]同左心收获纪律，体积不同

手术核对卡（近端胫骨髓腔）

屈膝约 90°，经髌韧带钻过生长板约 2–3 mm；针在骨内不可左右大幅度摆动。阻力大=在肌肉。[1][2]

核对项通过失败时
入路髌韧带白线、前交叉区标志不清：可小切口暴露（Wright）[2]
深度过生长板后落空感，~2–3 mm[2]易摆动：退出重进，勿把细胞打进软组织
推注10 μL 缓慢，几乎无阻力[1]阻力大：未入髓腔或堵针，换针沿原道[2]
对侧同样手法打 PBS[1]两侧都打细胞则失去自身对照

细胞培养卡（MDA-MB-231 / MC-h133）

倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。

约 50%（过稀）
空隙大，产量不够，再养一天
85–90%（传代 / 收获）
几乎铺满，仍有细缝；未堆叠
约 100%（过密）
空隙消失，不宜接种
点击放大

与左心同一套收获：80–90% 汇合，冰 PBS，30 min。[1]

项目做法
汇合80–90%；圆缩勿用于体内[1]
重悬2.5×10⁵ / 10 μL 冰 PBS[1]

成功标准

IT 比左心更快出现局部溶骨（约 1–3 周），截瘫窗口 21–28 天。[1][2]

时间点表现
D0无软组织外溢包块
1–3 周接种侧溶骨；对侧 PBS 应干净[2]
21–28 天恶病质/截瘫风险[1]

失败排查

软组织成瘤 = 外溢，不是髓腔模型。

现象原因处理
膝周包块打入肌肉该侧失败；核对针是否可摆动
即刻栓塞体征团块（少见，因未入动脉）停组查悬液
双侧溶骨对侧误打细胞该对照作废；预实验重做

监测记录字段

分左/右胫骨。跛行优先于影像。

字段如何记
侧别细胞侧 vs PBS 侧
跛行 / 体重触发终点则停
X 线/μCT近端胫骨

文献案例对照

本 SOP 对齐 JoVE 2.5×10⁵ / 10 μL。

文献细胞 / 体积手法读出
Campbell JoVE[1]2.5×10⁵ / 10 μL；对侧 PBS28G 经髌韧带21–28 天局部病程
Wright 2016[2]MDA-MB-231 胫骨内 1–3 周溶骨髌韧带钻入 2–3 mm跳过归巢，评肿瘤–骨互作
  1. 01
    【伦理】IACUC；镇痛与无菌。RUO。必看 JoVE 胫骨段[1]。不写麻醉剂量。

    髓腔局部接种，不是左心、不是尾静脉。必看同一篇 JoVE 的胫骨段。禁止 Matrigel。[1]

    物品每只鼠 / 本研究说明
    MDA-MB-231 MC-h1331 支起扩STR/支原体合格
    FBS MC10010% 完全培养液常规级
    PBS（冰上）10 μL/侧对侧常打 10 μL PBS 假手术[1]
    28G ½″ 针每侧 1 支经髌韧带入近端胫骨；堵针则换针沿原道[1][2]
    镇痛 / 无菌按批件本页不写剂量
  2. 02
    【细胞】80–90% 汇合；2.5×10⁵ / 10 μL 冰 PBS；无 Matrigel；30 min 内打完[1]。
  3. 03
    【手术】屈膝，28G 经髌韧带钻过生长板 2–3 mm，缓慢 10 μL；对侧 PBS。针可摆动=在肌肉，勿推注[1][2]。
  4. 04
    【监测】跛行、体重、X 线。21–28 天注意截瘫[1]。

    分左/右胫骨。跛行优先于影像。

    字段如何记
    侧别细胞侧 vs PBS 侧
    跛行 / 体重触发终点则停
    X 线/μCT近端胫骨

    软组织成瘤 = 外溢，不是髓腔模型。

    现象原因处理
    膝周包块打入肌肉该侧失败；核对针是否可摆动
    即刻栓塞体征团块（少见，因未入动脉）停组查悬液
    双侧溶骨对侧误打细胞该对照作废；预实验重做
  5. 05
    【终点】脱钙 HE、TRAP；细胞侧 vs PBS 侧。
  6. 06
    【解读】只评定植后骨破坏，不能外推归巢。

试剂 / 材料

名称用途浓度 / 用量
MDA-MB-231 细胞（MC-h133）胫骨髓腔接种2.5×10⁵ / 10 μL 冰 PBS[[1]]
麻醉剂 / 镇痛药手术与福利按伦理批件与兽医 SOP
受试药物 / 溶剂对照（可选）治疗臂按药理方案

读出指标

局部溶骨评分、μCT 骨量、组织学肿瘤负荷、跛行/体重。

参考文献（PubMed）

  1. [1]PMID 22972196 — Models of bone metastasis. J Vis Exp (2012)
  2. [2]PMID 27867497 — Murine models of breast cancer bone metastasis. Bonekey Rep (2016)

免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。

同株其他协议

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