适用场景
侧腹皮下接种 MDA-MB-231，建立便于测瘤径的异位 CDX，用于抗肿瘤药效初筛。皮下一般不当转移主模型（相对原位常不转移[1]），但个别共接种研究仍报早期播散，故标为弱证据而非绝对不转移。
仅供科研（RUO），非临床诊疗。必须先有动物伦理（IACUC）批件与 SPF 设施。本页不提供麻醉/镇痛剂量，不替代兽医 SOP。无批件请不要做。侧腹皮下不是第 4 脂肪垫手术。
用途一览
测瘤径药效走本页；要转移请换原位或实验性转移协议，不要把侧腹 SOP 硬套上去。
流程是否一致
药效与质控共用本页侧腹接种骨架；转移终点请换协议。
| 用途 | 与傻瓜流程关系 | 相对核心 SOP 的差异 |
|---|---|---|
| 测瘤径药效初筛 | 共用核心 SOP | 核心傻瓜步骤即本页。 |
| 细胞成瘤 / 制剂质控 | 共用核心 SOP | 接种相同；随访可更短。 |
| 转移主模型 | 换路径 / 协议 | 原位脂肪垫或尾静脉/心内/颅内，非侧腹皮下。 |
宿主规格：性别 × 品系 × 周龄
BITC 用雌性裸鼠[2]，Saghaeidehkordi 用 NOD-SCID[1]，Ring 用 NSG[3]。本 SOP 默认雌性裸鼠。不要把三种宿主的体积曲线直接混比。检疫适应按设施 SOP，常见 ≥3–7 天（BITC 适应 1 周）。RUO。
| 研究场景 / 癌种语境 | 性别 | 品系 / 宿主 | 说明 |
|---|---|---|---|
| 本 SOP 默认：侧腹成瘤 / 药效 | 雌性（必须） | 裸鼠 nu/nu；6–8 周；检疫 ≥3–7 天 | 对齐 BITC 6–7 周 + 适应 1 周[2]；细胞数约 1–2×10⁶ / 100 μL；预实验 n=3–5。 |
| NOD-SCID 药效示范 | 雌性 | NOD-SCID；8 周 | 2×10⁶ / 100 μL DMEM/F12:Matrigel 1:1，右胁，25G[1]。d26 约 131 mm³。 |
| NSG 更快成瘤 | 雌性 | NSG；8–10 周 | Ring：1×10⁶ / 100 μL，左后胁，组织胶[3]。3 周即可很大，人道终点须更早看。 |
| 雄性 | 不作为默认 | — | 三篇侧腹 SOP 均为雌性；雄性须批件说明且难以外推。 |
一句话造模
伦理批件 → 扩培细胞 → 侧腹皮下接种（Matrigel 1:1）→ 测瘤径 → 可选给药 → 终点称重/病理。
D−1 / D0 时间轴
1. D−7 至 D−3
免疫缺陷鼠 SPF 检疫适应（BITC：到货后适应 1 周）[[2]]；确认雌性、周龄；核对 IACUC。
2. D−1
细胞换液，保持 85–90% 汇合；小鼠称重；可选侧腹剃毛便于后期测径（不是第 4 乳头备皮）。
3. D0 上午
PBS 洗 → 胰酶 → 中和离心 → 无血清重悬 → 计数（活力≥90%）。
4. D0 配液
按配方卡与 Matrigel 卡 1:1 混合（+ 约 20%）；全程冰上。
5. D0 接种
提起皮肤 → 侧腹皮下缓慢注射见皮丘 → 外旋或组织胶。30–60 min 内打完。
6. D0 接种后
若麻醉则保温至翻正；记接种数、侧别与代次。
7. D+3 起
每周 1–2 次测瘤径与体重；触发人道终点则停止。
流程概览
以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。
- 伦理批件 + 免疫缺陷鼠检疫
- 扩培 MDA-MB-231（记代次；T75 见扩培表）
- 接种日消化计数（活力≥90%）
- 侧腹皮下接种（Matrigel 1:1，25G）
- 每周测瘤径与体重
- 达预定体积后可选给药
- 终点取瘤病理
新手操作包（文献案例）
流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。
开箱清单（侧腹皮下，按每只鼠规划）
有货号的链到本站产品。培养基以 MC-h133 说明书为准；侧腹文献用 DMEM/F12 或 DMEM + 10% FBS。本路径常用 Matrigel 1:1 与 25G，不是原位脂肪垫手术包。[1][2][3]
| 物品 | 每只鼠 / 本研究 | 说明 |
|---|---|---|
| MDA-MB-231 细胞 MC-h133 | 1 支起扩 | STR / 支原体合格；记代次 |
| 胎牛血清 FBS（常规培养） MC100 | 完全培养液 10% | 优先常规级；热灭活按说明书 |
| 培养基（DMEM/F12 或 DMEM） | T75 约 15 mL | Saghaeidehkordi：DMEM/F12[1]；Ring：DMEM[3]；说明书亦可 L-15 |
| 无钙镁 PBS / DPBS | 洗涤 + 重悬；接种体积见配方卡 | 接种悬液勿含血清；BITC 用 PBS:Matrigel 1:1[2] |
| 胰酶-EDTA（0.05–0.25%） | T75 约 3–5 mL | 消化至单细胞，勿过消化 |
| Matrigel / 基底膜基质（本路径常用） | 50 μL/只（1:1 时总体积 100 μL） | 冰上操作；比例见 Matrigel 卡[1][2][3] |
| T75 培养瓶或 10 cm 培养皿 | 见扩培案例表（三档细胞数） | 对数期 85–90% 汇合收获 |
| 1 mL 注射器 + 25G 针头 | 每只 1 套 + 备用 | 选 25G 以免剪切细胞[1]；死腔小于结核菌素针，按约 20% 多配 |
| 组织胶（可选） | 按穿刺点数 | Ring 用可降解组织胶封左侧腹穿刺点[3]；亦可用针尖外旋防漏[1] |
| 游标卡尺 | 全研究共用 | 本页体积 ≈ 长 × 宽² / 2；勿与椭球公式混用（见监测卡） |
扩培案例：只数 vs T75（侧腹三档）
接种配方卡（每只 + 整批）
本 SOP 常用约 1–2×10⁶ / 100 μL、Matrigel 1:1。高剂量臂对齐 BITC 2.5–5×10⁶，不要把原位 2×10⁶×1.5 直接拿来备瓶。配好后冰上，30–60 min 内打完。[1][2][3]
| 项目 | 本 SOP（常用） | 文献上限 / 变体 |
|---|---|---|
| 细胞数 / 接种点 | 约 1–2×10⁶ | Ring 1×10⁶[3]；Saghaeidehkordi 2×10⁶[1]；BITC 2.5–5×10⁶[2] |
| 注射体积 / 点 | 100 μL | 三篇均为 0.1 mL；Ring 先配 150 μL 浆再打 100 μL[3] |
| 基质 | Matrigel 1:1（50 μL 细胞悬液 + 50 μL 基质） | DMEM/F12:Matrigel 1:1[1][3] 或 PBS:Matrigel 1:1[2] |
| 单侧 vs 双侧 | 单侧后胁（右[1] 或左后胁[3]） | BITC：双侧后肢上方侧腹，每侧一针[2] |
| 整批倍数 | 接种点数 × 1.2（25G 死腔/损耗） | Ring 配 150 μL 打 100 μL ≈ 多配 50%[3] |
| 10 点整批细胞（SOP 2×10⁶） | 约 2.4×10⁷（2×10⁶ × 10 × 1.2）→ 见 T75 表 2×10⁶ 列 | 高剂量 5×10⁶：约 6.0×10⁷ → 见 T75 表右列 |
| 活力 | 台盼蓝 ≥90% | 低于 90% 不接种，退回扩培 |
Matrigel：侧腹 1:1（不要套脂肪垫 25%）
本页侧腹路径三篇文献均为约 1:1 基质，不是 Cheng 原位 25% 基底膜基质。冷操作按产品说明书；比例与防漏手法只引用侧腹论文。[1][2][3]
| 项目 | 本实验做法 |
|---|---|
| 加还是不加 | 本 SOP 常用加，1:1。三篇侧腹论文均带 Matrigel[1][2][3]。全组必须同一选择，并记批次。不要把原位 25% 配方抄到侧腹。 |
| 解冻与保存 | 按插页：通常 −20 °C 冻存；使用前在 4 °C / 冰上完全融化（常过夜），禁止室温或水浴化成团胶。融化后冰上分装。用时始终放冰上。 |
| 预冷清单 | 枪头、EP 管、1 mL 注射器与 25G 针头、PBS 或无血清培养液、细胞沉淀都先预冷。任何温热步骤（消化、中和、计数）都在混合之前完成。 |
| 混法（本 SOP 1:1） | 计数后，用预冷无血清 DMEM/F12 或 PBS 把细胞调到终浓度的 2 倍，再与等体积预冷 Matrigel 轻柔混匀（勿打出泡沫）。终体积 100 μL/点。Saghaeidehkordi：DMEM/F12:Matrigel 1:1[1]；BITC：PBS:Matrigel 1:1[2]。 |
| Ring 变体（配 150、打 100） | 1×10⁶ 细胞重悬于 75 μL DMEM/F12 + 75 μL Matrigel（共 150 μL 浆），注射 100 μL 到左后胁[3]。多出的约 50 μL 可覆盖装针损耗。 |
| 装针与防漏 | 预冷注射器吸取，排出气泡。推注见皮丘后：针尖略外旋再拔针，减少漏液[1]；或穿刺点组织胶封闭[3]。30–60 min 内打完；变稠、拉丝或堵针则整管弃掉。 |
接种核对卡（侧腹皮下，非脂肪垫手术）
提起皮肤打皮丘即可，不要做第 4 脂肪垫切开。本页不给麻醉剂量。无 IACUC 批件者不要做。漏液、无皮丘或进入肌层计为接种失败。[1][2][3]
| 核对项 | 通过标准 | 失败时 |
|---|---|---|
| 定位 | 后肢上方侧腹/胁部皮下；单侧右胁[1]、左后胁[3]或双侧[2] | 找错层次（肌层）则停止，勿盲打 |
| 入路 | 提起皮肤形成皮褶，针尖在皮与肌之间；可见活动皮丘 | 无皮丘或推注阻力大：退出，勿继续加压 |
| 针号 | 1 mL + 25G（防剪切细胞）[1] | 堵针：回冰上检查 Matrigel 是否凝固 |
| 防漏 | 见皮丘后针尖外旋再拔[1]，或组织胶封穿刺点[3] | 立即拔针且漏液：该点按失败记录 |
| 单侧 / 双侧 | 全组同一方案；双侧每侧一针、体积与细胞数按点计[2] | 一侧失败不要把剂量打到对侧凑数（除非批件允许） |
| 复苏 | 若用麻醉：保温至翻正；镇痛按批件。保定清醒接种则观察活动后回笼 | 长时间不醒或呼吸抑制 → 按人道终点 / 兽医 SOP |
细胞培养卡（MDA-MB-231 / MC-h133）
倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
以本站说明书为准。汇合度 = 贴壁细胞覆盖培养面积的百分比；铺展均匀时，倒置显微镜视野里被细胞占据的比例约等于该百分比。示意图非真实显微照片。侧腹文献要求对数期收获[2]。
| 项目 | 做法 |
|---|---|
| 培养基 | 说明书优先。Saghaeidehkordi：DMEM/F12 + 10% FBS，37°C、5% CO₂[1]。Ring：DMEM + 10% FBS[3]。ATCC 经典株亦见 L-15 + 10% FBS（注意 CO₂ 条件）。 |
| 汇合 85–90%（传代 / 收获） | 倒置镜下细胞约占视野的 85–90%：几乎铺满，但仍有细小空隙，未层层叠加、未卷边。MDA-MB-231 偏梭形，同样百分比会比铺路石上皮显得更「松」，以空隙为准，不要等到 100%。过稀（约 50%）产量不够；长满后活力下降，不宜接种。BITC 用指数生长期细胞[2]。 |
| 换液 / 传代 | 每周至少换液 2 次；达上述 85–90% 即传代，保持对数期，勿长满。BITC：指数生长细胞接种[2]。 |
| 代次 | 体内实验固定低–中代次窗口并记录。 |
| 接种日前一天 | 换液；镜检形态；准备按接种点数备足 T75（见扩培表）。 |
成功标准（预期，非承诺）
失败排查
按流程图节点对照。涉及动物福利的立即按批件执行，不要在网页上临时加剂量。
| 现象 | 常见原因 | 处理 |
|---|---|---|
| 悬液团块 / 堵针 | 消化不全、Matrigel 升温凝固 | 轻柔吹打或滤网；整管回冰；弃已凝固胶 |
| 活力 <90% | 过汇合、过消化、离冰过久 | 不接种；退回对数期扩培后重计 |
| 注射后漏液、无皮丘 | 体积过大、过快、未提起皮肤 | 该点记录失败；减慢推注；外旋或组织胶 |
| 瘤体固定、不随皮肤移动 | 可能打入肌层 | 该点不入药效组；预实验纠正层次 |
| 2 周仍无可触及瘤 | 漏种、细胞数过低、代次老化、品系不匹配 | 核对记录；升至文献上限前先查质控 |
| 溃疡、体重骤降、呼吸差 | 人道终点 | 立即按批件安乐死；勿为「看终点」拖延 |
监测记录字段（可打印抄写）
文献案例对照
本 SOP 取 1–2×10⁶ 中间剂量；T75 表按右列高剂量臂保守备瓶。点击 PMID 看原文。
| 文献 | 宿主 | 细胞数 | 体积 / 基质 / 针 | 读出 |
|---|---|---|---|---|
| Saghaeidehkordi 2021[1] | ♀ NOD-SCID，8 周 | 2×10⁶ / 右胁 | 100 μL DMEM/F12:Matrigel 1:1；1 mL + 25G；针尖外旋 | 每周 2 次卡尺；d26 ≈ 131 mm³；入组 100–150 mm³ |
| Warin / BITC 2010[2] | ♀ 裸鼠 nu/nu，6–7 周，适应 1 周 | 2.5–5×10⁶ / 侧，双侧 | 0.1 mL PBS:Matrigel 1:1；后肢上方侧腹 | 测瘤径与体重；对数期细胞 |
| Ring 2020[3] | ♀ NSG，8–10 周 | 1×10⁶ / 左后胁 | 配 150 μL（75+75）打 100 μL；组织胶封穿刺点 | 每周卡尺；亲本 3 周约 756 mm³ |
- 01【伦理与设施】取得 IACUC 批件；雌性免疫缺陷鼠 SPF 检疫适应 ≥3–7 天（BITC：适应 1 周[2]）。开箱清单与宿主表见上方。MDA-MB-231 按生物安全规范。仅供科研（RUO）。本页不能替代术者培训与兽医 SOP。
- 02【细胞准备 / 扩培 MDA-MB-231（记代次）】STR/支原体合格 MC-h133；固定代次。D−1 换液；消化前 85–90% 汇合、对数期[2]。培养条件见培养卡；T75 只数见扩培表（按 1/2/5×10⁶ 三档，不要套原位备瓶公式）。[1][2][3]
假设：对数期 T75 约 5×10⁶ 收获；25G 1 mL 针按 20% 多配（不是原位结核菌素 50% 死腔）。三档 = 本 SOP 常用 1×10⁶、常用上限 2×10⁶、BITC 高剂量臂 5×10⁶/接种点。10 cm 皿面积接近 T75。双侧把「只数」按接种点数计（1 只双侧 ≈ 2 点）。[1][2][3]
接种点（个） SOP 1×10⁶ T75 SOP 2×10⁶ T75 高剂量 5×10⁶ T75 1 1 1 2 2 1 1 3 3 1 2 4 4 1 2 5 5 2 3 6 6 2 3 8 7 2 4 9 8 2 4 10 9 3 5 11 10 3 5 12 倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
点击放大空隙大，产量不够，再养一天 几乎铺满，仍有细缝；未堆叠 空隙消失，不宜接种 以本站说明书为准。汇合度 = 贴壁细胞覆盖培养面积的百分比；铺展均匀时，倒置显微镜视野里被细胞占据的比例约等于该百分比。示意图非真实显微照片。侧腹文献要求对数期收获[2]。
项目 做法 培养基 说明书优先。Saghaeidehkordi：DMEM/F12 + 10% FBS，37°C、5% CO₂[1]。Ring：DMEM + 10% FBS[3]。ATCC 经典株亦见 L-15 + 10% FBS（注意 CO₂ 条件）。 汇合 85–90%（传代 / 收获） 倒置镜下细胞约占视野的 85–90%：几乎铺满，但仍有细小空隙，未层层叠加、未卷边。MDA-MB-231 偏梭形，同样百分比会比铺路石上皮显得更「松」，以空隙为准，不要等到 100%。过稀（约 50%）产量不够；长满后活力下降，不宜接种。BITC 用指数生长期细胞[2]。 换液 / 传代 每周至少换液 2 次；达上述 85–90% 即传代，保持对数期，勿长满。BITC：指数生长细胞接种[2]。 代次 体内实验固定低–中代次窗口并记录。 接种日前一天 换液；镜检形态；准备按接种点数备足 T75（见扩培表）。 - 03【接种日处理】PBS 轻洗，胰酶消化成单细胞，完全培养液中和后离心；无血清培养液或 PBS 重悬。台盼蓝 ≥90%。冰上，30–60 min 内接种完毕。配方与 20% 倍数见配方卡。
- 04
- 05【侧腹接种】按接种核对卡：提起皮肤、25G、缓慢至皮丘、外旋或组织胶。不要做第 4 脂肪垫切开。麻醉/镇痛剂量只允许来自批件。
- 06【监测】每周 1–2 次：本页体积 ≈ 长 × 宽² / 2；记体重。字段与公式差异见监测模板。溃疡或体重骤降按人道终点处理。
- 07【可选治疗臂】预定体积（如 100–150 mm³[1]）后随机分组；途径与溶剂写在批件。
- 08【终点】安乐死后取皮下瘤称重/病理。远处转移通常不是本模型读出；若研究转移请换原位或实验性转移协议。
- 09【质控】固定品系、性别、周龄、代次、侧别与接种参数；独立重复。失败先查排查表，再考虑改细胞数。
试剂 / 材料
| 名称 | 用途 | 浓度 / 用量 |
|---|---|---|
| MDA-MB-231 细胞（MC-h133） | 侧腹皮下接种 | 本 SOP 约 1–2×10⁶ / 100 μL；文献上限 2.5–5×10⁶[[2]] |
| 胎牛血清 FBS | 完全培养液 10% | 常规培养优先 MC100 |
| Matrigel（常用 1:1） | 助植 | 1:1 时约 50 μL/点，总体积 100 μL |
| 麻醉剂 / 镇痛药 | 手术与福利 | 按伦理批件与兽医 SOP |
| 受试药物 / 溶剂对照（可选） | 治疗臂 | 按药理方案 |
读出指标
皮下瘤体积/重量、体重、病理；一般不作为转移主模型。
参考文献（PubMed）
- [1]PMID 34063098 — Evaluation of a Keratin 1 Targeting Peptide-Doxorubicin Conjugate in a Mouse Model of Triple-Negative Breast Cancer. Pharmaceutics (2021)
- [2]PMID 20422714 — Inhibition of human breast cancer xenograft growth by cruciferous vegetable constituent benzyl isothiocyanate. Mol Carcinog (2010)
- [3]PMID 33167919 — EP300 knockdown reduces cancer stem cell phenotype, tumor growth and metastasis in triple negative breast cancer. BMC Cancer (2020)
免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。