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MDA-MB-231 原位后自发转移

三阴性乳腺癌 · MC-h133

适用场景

在第 4 脂肪垫原位成瘤（手法见原位页）后，长期观察或在 >300 mm³ 切除原发灶，追踪自发肺/淋巴结转移。覆盖出瘤 cascade，比尾静脉慢。亲本在裸鼠/NOD-SCID 几乎不自发到骨。不能替代术者培训。

细胞货号：MC-h133 · 产品造模页 · 体外球体

仅供科研（RUO）。脂肪垫接种必须按原位页与 IACUC 执行。本页不提供麻醉剂量，不替代兽医 SOP。不要把尾静脉或左心叫做自发转移。

用途一览

要完整 cascade 走本页；只要肺定植换尾静脉；只要骨归巢换左心。接种不要在本页重做一套。

用途适合度主要读出说明
切除后自发肺转移 / cascade推荐肺 BLI/HE、淋巴结；原发床须记复发[2][3]Minn：>300 mm³ 后切。Luc 强烈建议。
不切除、延长随访可用须把原发负荷与远处灶分开[1][2]原发灶会限制生存，转移窗可能被截断。
自发骨转移或实验性肺定植不推荐裸鼠亲本自发骨弱；尾静脉不是自发骨请换左心/胫骨或 NSG 并写明。肺定植换尾静脉。

流程是否一致

接种与原位页相同；本页多切除与长随访。

用途与傻瓜流程关系相对核心 SOP 的差异
切除后 cascade核心 + 附加模块原位骨架 + 切除窗。
不切除随访核心 + 附加模块无切除日。
尾静脉 / 左心换路径 / 协议跳过出瘤，不是自发。

宿主规格

默认雌性裸鼠，与原位页一致[1]。NSG 自发谱更宽（含骨的可能性更高），须单独写进批件[4]。

研究场景 / 癌种语境性别品系 / 宿主说明
本 SOP 默认雌性裸鼠预期肺/淋巴结，不预期骨。
更宽自发谱雌性NSGWright：NSG 比裸鼠/NOD-SCID 更容许自发骨等；负荷更快，终点更早[4]。
雄性不作为默认—脂肪垫模型以雌性为准。

一句话造模

原位接种（见原位页）→ 原发灶生长 → 可选切除 → 长期转移随访 → 多器官病理。

D−1 / D0 时间轴

  1. 1. D−7 至 D0

    按原位页完成检疫与第 4 脂肪垫接种。

  2. 2. 成瘤期

    卡尺至预定体积（常 >300 mm³ 再考虑切除）。

  3. 3. 切除日（可选）

    切净原发灶；假手术对照。

  4. 4. 此后数周至数月

    BLI/呼吸/淋巴结；终点多器官病理。

流程概览

以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。

  1. 完成原位接种（见原位页，不在本页复述脂肪垫手术）
  2. 测瘤径至预定窗口
  3. 可选手术切除原发灶（常 >300 mm³）
  4. BLI / 临床长期随访
  5. 终点多器官取材
  6. 定量转移负荷

新手操作包（文献案例）

流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。

开箱清单（切除 + 长期随访；接种见原位页）

脂肪垫手术、Matrigel 与 26–27G 针法全部在原位页，本页不复述 Cheng 25% 基质。本页只多备切除与 BLI。[1][3]

物品每只鼠 / 本研究说明
MDA-MB-231 / Luc 株 MC-h1331 支起扩接种参数跟原位页；Luc 强烈建议，须验证表型[2]
游标卡尺全研究共用体积 ≈ 长 × 宽² / 2；切除窗常用 >300 mm³[3]
切除器械 / 缝线 / 止血按手术只数切缘干净；假手术对照；镇痛按批件。本页不写剂量
BLI 底物（Luc）按成像 SOPJenkins：原位 + 多器官转移可活体检出[2]
长期 SPF 笼位数周至数月呼吸窘迫、溃疡、体重骤降写进批件

扩培案例：只数 vs T75（与原位页同一套保守假设）

2×10⁶/只 + 50% 死腔。接种体积、基质与第 4 脂肪垫手法见原位页，不要在本页另配一套。

裸鼠（只）T75（瓶）
11
22
32
43
53
64
75
85
96
106

接种配方（指向原位页）

本页不重写脂肪垫 SOP。Price/Jenkins 原位成瘤后才能谈自发转移。[1][2]

项目本 SOP文献
接种打开原位页执行第 4 脂肪垫Price 裸鼠原位[1]；Luc 见 Jenkins[2]
细胞数 / 基质不要在本页另选剂量与原位 SOP 锁定同一批细胞
切除窗预定体积后切原发灶Minn：>300 mm³ 后切，再随访肺[3]
不切除臂原发灶留到人道终点须把原发负荷与转移分开解读

切除核对卡（不是脂肪垫接种卡）

Minn 在原发灶 >300 mm³ 后切除再评肺转移。切不净会把残留当成「转移」。本页不写麻醉剂量。[3]

核对项通过失败时
体积窗达到批件预定体积（常 >300 mm³）[3]过早切：转移尚未启动；过晚：溃疡/负荷
切缘肉眼切净、止血、闭合残留结节：该只退出转移主分析或单列
对照假手术或体积匹配不切除无对照无法把手术本身与转移分开
术后镇痛按批件；记体重不醒或呼吸差 → 兽医 SOP

细胞培养卡（MDA-MB-231 / MC-h133）

倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。

约 50%（过稀）
空隙大，产量不够，再养一天
85–90%（传代 / 收获）
几乎铺满，仍有细缝；未堆叠
约 100%（过密）
空隙消失，不宜接种
点击放大

培养与原位页相同。Luc 株须验证不影响增殖/转移[2]。示意图非真实显微照片。

项目做法
培养基说明书优先。接种日处理见原位页。
汇合85–90% 收获；不要把原位汇合示意改成另一套。
标记株Luc/GFP 富集后与亲本平行或再验证转移表型[2]。

成功标准（预期，非承诺）

裸鼠原位后常见肺/淋巴结，不是保证骨转移。Wright：亲本在裸鼠/NOD-SCID 原位后几乎不自发到骨；更深免疫缺陷（如 NSG）才更可能。[1][3][4]

时间点表现
接种后 2–4 周原位可测体积（见原位页）
切除时体积达窗、切缘干净[3]
切除后数周Luc：肺 BLI；亲本须解剖确认[2][3]
骨裸鼠/NOD-SCID 亲本不要预期自发骨灶；要骨请换左心/胫骨[4]

失败排查

原发灶切不净、随访太短、或把实验性肺转移（尾静脉）当成自发，都会写错结论。

现象原因处理
原位床很快长回残留不计入切除后转移主终点
无远处灶随访短、亲本惰性、或 Luc 假阴性延长至批件上限并做 HE；Jenkins 强调活体可检出但须验证[2]
把骨转移当自发成功宿主/预期错裸鼠亲本自发骨弱；改左心或换 NSG 并写明[4]
呼吸差 / 溃疡负荷或原发灶立即人道终点，不要为「等到转移」拖

监测记录字段

原发体积与远处读出必须分开记。Luc 按计划全身 BLI。

字段如何记
原发体积切除前 2–3 次/周；切除后记床是否复发
切除日 / 体积D0′ = 切除日；记下实际 mm³
体重 / 呼吸 / 淋巴结触发终点则停
BLI（Luc）胸腔 vs 原位床 ROI 分开[2][3]

文献案例对照

本页评 cascade；实验性肺定植请换尾静脉页。

文献宿主设计读出
Price 1990[1]裸鼠脂肪垫亲本成瘤与转移谱自发转移存在但器官谱须按株记录
Jenkins 2005[2]免疫缺陷鼠Luc 株原位 + 活体成像乳腺原发与多处转移可快速检出；标记须验证
Minn 2005[3]免疫缺陷鼠脂肪垫原发 >300 mm³ 后切除，筛肺转移得到 LM 群体；不要把尾静脉 LM2 SOP 混进本页
Wright 2016[4]裸鼠 / NOD-SCID / NSG综述自发 vs 实验性骨转移亲本在裸鼠/NOD-SCID 原位后几乎不自发到骨；NSG 更宽松；要骨请换左心/胫骨
  1. 01
    【前置】打开原位页完成伦理、细胞、第 4 脂肪垫接种（Price；Jenkins）。本页不重复 Cheng 25% 基质或乳头手术步骤。RUO。不写麻醉剂量。
  2. 02
    【原发灶】卡尺体积曲线。切除臂：预定体积（Minn 常用 >300 mm³）后切净、止血、假手术对照[3]。

    Minn 在原发灶 >300 mm³ 后切除再评肺转移。切不净会把残留当成「转移」。本页不写麻醉剂量。[3]

    核对项通过失败时
    体积窗达到批件预定体积（常 >300 mm³）[3]过早切：转移尚未启动；过晚：溃疡/负荷
    切缘肉眼切净、止血、闭合残留结节：该只退出转移主分析或单列
    对照假手术或体积匹配不切除无对照无法把手术本身与转移分开
    术后镇痛按批件；记体重不醒或呼吸差 → 兽医 SOP
  3. 03
    【随访】数周至数月；Luc 全身 BLI，胸腔 ROI 与原位床分开[2][3]。呼吸与体重优先。

    原发体积与远处读出必须分开记。Luc 按计划全身 BLI。

    字段如何记
    原发体积切除前 2–3 次/周；切除后记床是否复发
    切除日 / 体积D0′ = 切除日；记下实际 mm³
    体重 / 呼吸 / 淋巴结触发终点则停
    BLI（Luc）胸腔 vs 原位床 ROI 分开[2][3]
  4. 04
    【终点】原位床、肺、淋巴结、肝、骨系统取材。裸鼠亲本自发骨不要当阳性预期[4]。
  5. 05
    【对照解读】比尾静脉慢、异质性高，但包含出瘤。不要把 i.v./左心结果写成自发。
  6. 06
    【质控】固定切除时机与随访时长；独立重复。Luc 须验证表型[2]。

    Minn 在原发灶 >300 mm³ 后切除再评肺转移。切不净会把残留当成「转移」。本页不写麻醉剂量。[3]

    核对项通过失败时
    体积窗达到批件预定体积（常 >300 mm³）[3]过早切：转移尚未启动；过晚：溃疡/负荷
    切缘肉眼切净、止血、闭合残留结节：该只退出转移主分析或单列
    对照假手术或体积匹配不切除无对照无法把手术本身与转移分开
    术后镇痛按批件；记体重不醒或呼吸差 → 兽医 SOP

试剂 / 材料

名称用途浓度 / 用量
MDA-MB-231 细胞（MC-h133）原位接种（参数见原位页）同原位 SOP（约 1×10⁶ 级；保守备瓶按 2×10⁶）
Luc 标记株（强烈建议）全身转移成像验证表型后使用[[2]]
麻醉剂 / 镇痛药手术与福利按伦理批件与兽医 SOP
受试药物 / 溶剂对照（可选）治疗臂按药理方案

读出指标

原发瘤曲线、远处器官转移灶数/负荷、BLI、生存期、多器官病理。

参考文献（PubMed）

  1. [1]PMID 2297709 — Tumorigenicity and metastasis of human breast carcinoma cell lines in nude mice. Cancer Res (1990)
  2. [2]PMID 15987449 — Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice. Breast Cancer Res (2005)
  3. [3]PMID 16049480 — Genes that mediate breast cancer metastasis to lung. Nature (2005)
  4. [4]PMID 27867497 — Murine models of breast cancer bone metastasis. Bonekey Rep (2016)

免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。

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