适用场景
左心室动脉注射 MDA-MB-231（或 BO/B02），建立实验性溶骨转移。亲本 3–4 周多骨，偶发肾上腺/卵巢/脑；BO 几乎只骨。本页按 JoVE 新手清单编写，不能替代术者培训。
仅供科研（RUO）。必须 IACUC、SPF 与左心注射培训。本页不提供麻醉剂量，不替代 JoVE 与兽医 SOP。禁止 Matrigel。无鲜红回血不要推注。
用途一览
要骨归巢/定植走本页；要局部骨微环境请换胫骨内；要完整 cascade 请换原位后自发转移。
流程是否一致
溶骨筛与 BO 比较共用左心骨架；胫骨与脑请换协议。
| 用途 | 与傻瓜流程关系 | 相对核心 SOP 的差异 |
|---|---|---|
| 实验性溶骨 | 共用核心 SOP | 即本页。 |
| BO vs 亲本 | 核心 + 附加模块 | 同一针；解剖谱不同。 |
| 胫骨内 / 脑 / 原位自发 | 换路径 / 协议 | 髓腔、BR 左心或脂肪垫，非本针。 |
一句话造模
伦理批件 → 细胞准备 → 左心注射 → X 线/BLI/体征 → 终点骨病理。
D−1 / D0 时间轴
1. D−7 至 D−3
雌性裸鼠检疫；写明截瘫/恶病质终点。
2. D−1
换液，80–90% 汇合[[1]][[2]]。
3. D0
冰 PBS 1×10⁵/100 μL → 左心。30 min 内打完。
4. D+14 起
体重、后肢；约 3 周 X 线。
流程概览
以下为该场景专用流程图（在核心接种骨架上调整宿主/给药或影像/读出）。
- 伦理批件 + 免疫缺陷鼠（截瘫/恶病质终点）
- 扩培亲本或 BO/B02（记代次；T75 见扩培表）
- 单细胞悬液（防栓，无 Matrigel）
- 麻醉后左心室注射（鲜红回血，28G，100 μL）
- X 线 / BLI / 体重
- 终点长骨病理与影像
新手操作包（文献案例）
流程图按钮可弹出对应表。以下为全套清单，按顺序准备即可。
开箱清单（左心室骨转移，按每只鼠规划）
静脉动脉播散，禁止 Matrigel。必看 Campbell JoVE 视频。本页不给麻醉剂量。[1][2]
| 物品 | 每只鼠 / 本研究 | 说明 |
|---|---|---|
| MDA-MB-231 或 BO/B02 亚系 MC-h133 | 1 支起扩 | STR/支原体合格；BO 比亲本更偏骨、少内脏[1] |
| 胎牛血清 FBS MC100 | 完全培养液 10% | 优先常规级 |
| 培养基 | T75 约 15 mL | 说明书优先；JoVE 80–90% 汇合传代[2] |
| 无钙镁 PBS（冰上） | 100 μL/只 | JoVE：冰 PBS 防团块/栓塞，30 min 内打完[2] |
| 胰酶-EDTA | T75 约 3–5 mL | JoVE 用较稀胰酶快脱、少团块[2] |
| T75 | 见扩培表；JoVE 约 1 瓶/8–10 只[2] | 80–90% 汇合收获 |
| 300 μL 胰岛素针 28G ½″ | 每只 1 支 | Yoneda 28G；JoVE 用针管内小气泡看搏动，勿把空气推进心室[1][2] |
| X 线 / μCT / 可选 GFP 成像 | 全研究共用 | 溶骨约 3 周才明显；14 天 GFP 常需离体才见[2] |
扩培案例：只数 vs T75（左心 1×10⁵）
1×10⁵/只 + 20%（胰岛素针死腔小于结核菌素）。对数期 T75 按 5×10⁶ 计。JoVE：1 瓶覆盖 8–10 只[2]。不要套原位 2×10⁶ 备瓶。
| 裸鼠（只） | T75（瓶） |
|---|---|
| 1 | 1 |
| 2 | 1 |
| 3 | 1 |
| 4 | 1 |
| 5 | 1 |
| 6 | 1 |
| 7 | 1 |
| 8 | 1 |
| 9 | 1 |
| 10 | 1 |
接种配方卡（左心；无基质）
接种核对卡（左心室，非尾静脉、非胫骨）
细胞培养卡（MDA-MB-231 / MC-h133）
倒置显微镜（示意 10× 视野）：汇合度是细胞铺满培养面积的百分比。单层铺匀时，镜头里被细胞占住的面积大约就是这个百分比。传代 / 接种取中间幅。点击示意图可放大。
成功标准（预期，非承诺）
失败排查
瘫痪、恶病质立即按批件，不要为「看溶骨」拖延。
| 现象 | 常见原因 | 处理 |
|---|---|---|
| 即刻死亡 / 肺出血 | 右心、胸腔漏种、空气或团块 | 停组查针位与悬液 |
| 无鲜红回血仍推注 | 未入左心 | 该只失败；对照 JoVE |
| 4 周无溶骨 | 假注射、细胞不活、亚系错 | 核对回血记录；勿盲目加细胞 |
| 截瘫 / 体重骤降 | 脊髓/负荷过大 | 立即人道终点 |
监测记录字段
每周体重、后肢、X 线。本页不测皮下瘤径。
| 字段 | 如何记 |
|---|---|
| 日期 / D0 | 左心日 |
| 回血是否鲜红搏动 | 是 / 否（否=失败） |
| 体重 / 后肢 / 截瘫 | 触发终点则停 |
| X 线溶骨 | 股骨远端/胫骨近端为主[3] |
文献案例对照
本 SOP 取 1×10⁵ / 100 μL。点击 PMID 看 JoVE 视频。
| 文献 | 宿主 | 细胞 | 手法 | 读出 |
|---|---|---|---|---|
| Yoneda 2001[1] | ♀ 裸鼠 4 周 | 1×10⁵ / 0.1 mL PBS；28G | 俯卧，鲜红回血后左心 | 亲本 3–4 周骨 ± 肾上腺/卵巢/脑；BO 只骨，BR 只脑 |
| Campbell JoVE 2012[2] | ♀ 裸鼠 4–6 周 | 1×10⁶/mL → 100 μL；骨亲和 GFP 克隆 | 28G 胰岛素针；剑突–切迹中点偏左 | 溶骨约 3 周；21–35 天恶病质/截瘫；必看视频 |
| Wright 2016[3] | 裸鼠 / NOD-SCID / NSG | 1×10⁵ 心内 | 动脉播散至长骨、脊柱、颌 | 2–3 周溶骨；亚系可至约 90% |
| Peyruchaud 2001[4] | 裸鼠 | 1×10⁵ / 0.1 mL | 左心；B02 筛选 | GFP 早检溶骨；勿把尾静脉 B02 SOP 混进左心页 |
试剂 / 材料
| 名称 | 用途 | 浓度 / 用量 |
|---|---|---|
| MDA-MB-231 细胞（MC-h133） | 左心接种 | 1×10⁵ / 100 μL 冰 PBS[[1]][[2]] |
| 骨亲和亚系（可选，BO/B02） | 提高骨定植、减少内脏 | 同 1×10⁵；来源与代次必须记录[[1]][[4]] |
| 麻醉剂 / 镇痛药 | 手术与福利 | 按伦理批件与兽医 SOP |
| 受试药物 / 溶剂对照（可选） | 治疗臂 | 按药理方案 |
读出指标
溶骨灶评分、μCT/X 线、BLI/GFP、骨病理、体重/运动功能。
参考文献（PubMed）
- [1]PMID 11499871 — A bone-seeking clone exhibits different biological properties from the MDA-MB-231 parental human breast cancer cells and a brain-seeking clone in vivo and in vitro. J Bone Miner Res (2001)
- [2]PMID 22972196 — Models of bone metastasis. J Vis Exp (2012)
- [3]PMID 27867497 — Murine models of breast cancer bone metastasis. Bonekey Rep (2016)
- [4]PMID 11697798 — Early detection of bone metastases in a murine model using fluorescent human breast cancer cells: application to the use of the bisphosphonate zoledronic acid in the treatment of osteolytic lesions. J Bone Miner Res (2001)
免责：RUO；须 IACUC；参数按品系与预实验调整，非标准临床操作。红字标签表示亲本株转移终点证据弱或不作为转移模型。