细胞培养 / 类器官 / 胆管癌 PDO

胆管癌 / 胆道肿瘤 PDO 建库 protocol

患者来源肝内 / 肝外胆管癌及胆道肿瘤类器官：消化包埋后用胆管上皮 niche（R-spondin / EGF / FGF10 / HGF、A83-01、Forskolin 等）建库，与正常肝胆管扩增分皿，做 CK19 / CK7 质控与药敏。[1][2]

适用场景

胆管癌 PDO，不是正常肝胆管扩增全程，也不是 HepG2 / HuCCT1 球体。

用途适合度主要读出说明
胆管癌 / 胆道肿瘤 PDO 活库与药敏推荐基因组保持、患者特异药敏[1][2]Broutier / Saito 平台覆盖肝原发癌与胆道癌药筛。
配对正常胆管扩增对照对照毒性 / 选择性正常对照可走肝类器官扩增页；与肿瘤分皿。
HuCCT1 / HepG2 球体当 CCA PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

胆道肿瘤小团 → dome → Rspo/EGF/FGF10/HGF niche → 短期 Y-27632 → 机械传代 → CK19 → 药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录 iCCA / eCCA / 胆囊癌等部位与分子分型
  2. 剔除坏死；胶原酶 ± Dispase 至小团；血性短时裂红（MC427）
  3. 基质胶 dome；胆管上皮 niche（Rspo、EGF、FGF10、HGF、烟酰胺、A83-01、Forskolin 等）[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632；观察囊状胆管样生长
  5. 换液 2–3 天；机械传代；肿瘤与配对正常胆管分皿
  6. CK19、CK7、EpCAM；支原体；与原发灶对照
  7. 药敏设溶媒；体内成瘤走移植 SOP，不是本页

第 1 步 · 取材与消化

  1. 记录解剖部位（肝内 / 肝外 / 胆囊）与分子分型。
  2. 胶原酶（MC412）± Dispase（MC413）至小团；血性短时裂红（MC427）。
  3. 肿瘤与正常胆管分器械。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. 完整胆管配方起步[1][2]；与正常肝胆管扩增分库。
  2. 间质长满时上调 A83-01 或缩短消化。
  3. 机械传代；记录代数与 BME 批号。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. CK19 / CK7 / EpCAM；支原体；与原发灶对照。
  2. 药敏设溶媒；解读对照临床方案[1][2]。
  3. 体内验证走移植模型，不是本页。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
R-spondin + EGF + FGF10 + HGF胆管 / CCA 核心[1][2]打开 →
烟酰胺 / A83-01 / Forskolin人胆管扩增常见打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
红细胞裂解液血性标本短时裂红打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制；人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7；减少间质长满询价
ForskolinMCK1832腺苷酸环化酶；cAMP；卵巢等配方常见询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗；ENR / PDO niche；双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大；长期扩增蛋白询价
重组人 Wnt3aMGF30004人结肠 / CRC 建库 / 导管 / 胃 / 卵巢 / 肝 Wnt蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价
重组人 HGFMGF30010人肝胆管类器官关键蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
CK19CK19 抗体MCAB5312导管 / 胆管样上皮；胰与部分肺 / 卵巢 / 膀胱 / 头颈
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮；多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
CK7CK7 抗体MCAB5547胆管 / 尿路 / 部分肾小管 / 食管 / 甲状腺 / 间皮上皮质控
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红
按本表询价培养补充剂分类

药敏 ↔ 球体 / 造模 / 移植分工

本页 PDO 药敏在基质胶 dome 内完成，读数与给药窗口按本 SOP。细胞株球体 / 2D 活力读数走球状体专页与细胞造模；体内成瘤与 PDX 走细胞移植模型。勿把三条流程的步骤混用。

球状体培养细胞造模细胞移植模型

参考文献

  1. [1] Human primary liver cancer–derived organoid cultures for disease modeling and drug screening. Nat Med. 2017. PMID 29131160
  2. [2] Establishment of Patient-Derived Organoids and Drug Screening for Biliary Tract Carcinoma. Cell Rep. 2019. PMID 31018139

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。