细胞培养 / 类器官 / 子宫内膜癌 PDO

子宫内膜癌 / 内膜疾病 PDO 建库 protocol

患者来源子宫内膜上皮类器官:消化包埋后用内膜 niche(EGF / Noggin / R-spondin / FGF10、A83-01、烟酰胺等;激素响应按课题 ±E2)建库,覆盖癌与部分良性内膜疾病,做 PAX8 / CK / ERα 质控与药敏。[1][2]

适用场景

内膜 PDO / 疾病类器官,不是 Ishikawa 球体,也不是完整蜕膜化诱导课程。

用途适合度主要读出说明
内膜癌 / 增生 / 异位症活库与药敏推荐亚型保持、患者特异药敏[1]Boretto 平台覆盖癌与多种内膜疾病并可移植回体内复现。
正常内膜激素响应对照(Turco 路线)对照±E2 形态 / 标记与肿瘤分皿;激素结论固定 E2 / 血清批号。
Ishikawa 球体当 PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

内膜组织小团 → dome → EGF/Rspo/FGF10 niche → 短期 Y-27632 → 机械传代 → PAX8/ER → 药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链;记录组织学亚型、分级与激素受体状态
  2. 剔除坏死;胶原酶至小团;血性短时裂红(MC427)
  3. 基质胶 dome;内膜 niche(EGF、Noggin、R-spondin、FGF10、A83-01、烟酰胺等)[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632;观察囊状出芽
  5. 换液 2–3 天;机械传代;癌与良性 / 异位内膜分皿
  6. PAX8、CK8/18、EpCAM、ERα(按课题);支原体
  7. 激素臂:无血清或 CSS±E2±孕酮;与默认扩增分皿
  8. 药敏设溶媒;体内成瘤走移植 SOP,不是本页

第 1 步 · 标本处理

  1. 记录分期 / 分子分型(若有)与激素受体。
  2. 胶原酶至小团;血性短时裂红(MC427)。
  3. 癌、增生、异位内膜分器械分皿。

第 2–3 步 · niche 与激素

  1. 完整内膜配方起步[1][2]。
  2. 激素操纵用 ±E2(或 CSS±E2)另皿,勿与默认扩增混批。
  3. 间质长满时上调 A83-01。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. PAX8、CK8/18、EpCAM、ERα;支原体。
  2. 药敏设溶媒;与临床方案对照[1]。
  3. 体内验证走移植模型,不是本页。

Niche 试剂起点(须滴定)

下表为文献常见起点,不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + Noggin + R-spondin + FGF10内膜核心[1][2]打开 →
A83-01 / 烟酰胺人上皮稳定打开 →
雌二醇 E2(激素臂)默认扩增可不加;激素读出另皿打开 →
孕酮(激素臂)常与 E2 联用;另皿滴定打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
红细胞裂解液血性标本短时裂红打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号;价格均为询价。生长因子(EGF/Noggin/R-spondin 等)属蛋白类,见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制;接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制;人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7;减少间质长满询价
雌二醇 E2MCK1835ER+ 乳腺类器官激素臂询价
孕酮MCK1838乳腺 / 内膜激素臂;与 E2 联用另皿询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号;价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗;ENR / PDO niche;双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大;长期扩增蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记;深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
CK8CK8 抗体MCAB5383腔面 / 上皮谱系
CK18CK18 抗体MCAB5028腔面上皮;乳腺/前列腺/卵巢/内膜常用
ERαERα 抗体MCAB5041乳腺癌 / 内膜亚型与临床病理对照
PR孕激素受体 (PR) 抗体MCAB5590乳腺 / 内膜激素受体质控
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮;多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
PAX8PAX8 抗体MCAB5911卵巢 / 苗勒管 / 内膜 / 肾来源上皮质控

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号;浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,200 mM)MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染;稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质(BME)MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
活性炭处理胎牛血清(CSS)MC419含血清激素操纵场景;默认无血清建库一般不用
HEPES 缓冲液(1 M)MC305类器官培养基缓冲;按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选;可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂(Primocin 类)MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底(U 底)96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板;与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红

参考文献

  1. [1] Patient-derived organoids from endometrial disease capture clinical heterogeneity and are amenable to drug screening. Nat Cell Biol. 2019. PMID 31371824
  2. [2] Long-term, hormone-responsive organoid cultures of human endometrium in a chemically defined medium. Nat Cell Biol. 2017. PMID 28319085
免责声明:仅供科研参考(RUO),不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。