细胞培养 / 类器官 / 乳腺癌 PDO

乳腺癌 PDO 建库 protocol

患者来源乳腺肿瘤类器官：消化包埋后用含神经调节蛋白-1 的 Sachs 型培养基扩增，按 ER/HER2 亚型加激素或靶向对照。[1][2]

适用场景

乳腺癌 PDO，不是 MCF-7 球体，也不是正常乳腺器官发生全程。

用途适合度主要读出说明
手术标本乳腺癌 PDO 活库推荐亚型保持、药敏[1]Sachs 活库显示器官样培养可保留异质性。
正常或癌前乳腺类器官对照结构与克隆形成[2][3]配方接近但不要与肿瘤药敏皿混用。
MCF-7 / MDA-MB-231 球体勿混用球体活力细胞株 3D 不是 PDO。

一句话造模

乳腺肿瘤小团 → dome → NRG1 + EGF/FGF/Noggin/Rspo → 短期 Y-27632 → 按亚型 ±E2 → CK/ER/HER2 质控后药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录 ER / PR / HER2 / Ki-67
  2. 剔除脂肪；胶原酶消化至上皮小团
  3. 基质胶 dome；Sachs 型培养基（含 NRG1）[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632；ER+ 可加雌二醇，三阴不要套激素
  5. 换液 2–3 天；1–3 周按生长传代
  6. CK8/18 ± ER/HER2 与临床病理对照；支原体
  7. 药敏：内分泌、抗 HER2、化疗按亚型设臂[[1]]
  8. 体内移植另页；本页不写小鼠接种

第 1 步 · 取材消化

  1. 记录临床亚型；脂肪多的标本先剔除以免基质被油污染。
  2. 胶原酶消化至上皮团；避免打成纯单细胞[2]。

第 2–3 步 · NRG1 niche

  1. Dome 包埋后加含神经调节蛋白-1 的完全培养基[1]。
  2. ER+ 可加 E2；HER2+ 药敏臂再上抗 HER2，不要一开培就加治疗剂量抗体当维持因子。
  3. Y-27632 短期；长期 ROCK 抑制会改克隆组成。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 传代机械为主；建库前 IHC/IF 对 ER、HER2、CK。
  2. 三阴、HER2+、腔面型分皿做药敏，勿用单一化疗板代表全库[1]。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
Advanced DMEM/F12 + B-27 + NRG1Sachs 培养基关键[1][2]打开 →
EGF / FGF7 / FGF10 / Noggin / R-spondin乳腺上皮 niche打开 →
雌二醇（ER+）激素依赖株；TNBC 默认不加打开 →
孕酮（PR+ 激素臂）与 E2 联用另皿；TNBC 默认不加打开 →
Y-27632、SB202190、烟酰胺接种与人上皮稳定[2]打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制；人上皮类器官稳定询价
雌二醇 E2MCK1835ER+ 乳腺类器官激素臂询价
孕酮MCK1838乳腺 / 内膜激素臂；与 E2 联用另皿询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗；ENR / PDO niche；双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大；长期扩增蛋白询价
重组人 NRG1MGF30005乳腺类器官 Sachs 关键；部分肺配方可选蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价
重组人 FGF7（KGF）MGF30008乳腺 / 气道上皮配方常用蛋白询价
重组人 IGF-1MGF30013部分上皮 / 乳腺 / 肝配方可见蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
CK8CK8 抗体MCAB5383腔面 / 上皮谱系
CK18CK18 抗体MCAB5028腔面上皮；乳腺/前列腺/卵巢/内膜常用
ERαERα 抗体MCAB5041乳腺癌 / 内膜亚型与临床病理对照
PR孕激素受体 (PR) 抗体MCAB5590乳腺 / 内膜激素受体质控
HER2HER2 / ErbB2 抗体MCAB5210HER2+ 乳腺 PDO 质控与药敏分臂
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮；多组织 PDO 通用
Ki-67Ki-67 抗体B10315增殖指数；药敏前后对照
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
ITS 补充剂 100×MC311胰岛素-转铁蛋白-硒；部分上皮配方
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
N-乙酰半胱氨酸（NAC）MC417前列腺等上皮配方抗氧化组分
氢化可的松MC418乳腺 / 气道等上皮配方添加剂
活性炭处理胎牛血清（CSS）MC419含血清激素操纵场景；默认无血清建库一般不用
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
TrypLE 温和解离液MC426PSC / 类器官温和传代备选
按本表询价培养补充剂分类

参考文献

  1. [1] A living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity. Cell. 2018. PMID 29224780
  2. [2] Long-term culture, genetic manipulation and xenotransplantation of human normal and breast cancer organoids. Nat Protoc. 2021. PMID 33692550
  3. [3] Organoid cultures from normal and cancer-prone human breast tissues yield comparable breast epithelial disease models. Nat Commun. 2020. PMID 32398863

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。