细胞培养 / 类器官 / 胶质母细胞瘤 PDO

胶质母细胞瘤 PDO 建库 protocol

患者来源胶质母细胞瘤类器官（GBO）：新鲜切除标本微切 / 消化后包埋，用神经肿瘤 niche（Neurobasal / B-27 / N-2、EGF / FGF2 等）建库，保留异质性与浸润表型，并做药敏 / CAR-T 等对照；与 PSC 大脑类器官分册。[1][2]

适用场景

GBM PDO，不是 U87 球体，也不是 PSC 大脑类器官诱导全程。

用途适合度主要读出说明
GBM 切除标本 PDO 活库与药敏 / 免疫治疗预实验推荐异质性保持、药敏与 CAR-T 对照[1][2]Jacob / STAR Protocols 支持建库与小鼠原位验证衔接。
与 PSC 脑类器官共培养 / 浸润对照对照浸润距离、谱系标记PSC 脑类器官另页；勿把诱导步骤套进 GBM 建库。
U87 / LN229 球体当 GBM PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

GBM 组织微切 → dome / 悬浮 → EGF/FGF2 神经肿瘤 niche → 短期 Y-27632 → 传代 → SOX2/Nestin → 药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录 IDH / MGMT 等分子分型与取材部位
  2. 剔除坏死；微切 ± 温和消化至小团（勿打成纯单细胞）
  3. 基质胶包埋或文献悬浮体系；Neurobasal / B-27 / N-2 + EGF / FGF2[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632；观察实性 / 浸润样生长
  5. 换液 2–3 天；机械传代；记录代数与培养基批次
  6. SOX2、Nestin、±MAP2；支原体；与原发灶对照
  7. 药敏 / CAR-T 对照设溶媒；原位移植走移植 SOP，不是本页

第 1 步 · 取材与解离

  1. 记录分子分型；坏死与正常脑尽量分器械。
  2. 微切优先；需要时胶原酶（MC412）± Dispase（MC413）短时。
  3. 过筛去大碎片；勿追求纯单细胞。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. Neurobasal / B-27 / N-2 + EGF / FGF2 起步[1][2]。
  2. 与 PSC 脑诱导培养基分批；记录因子批次。
  3. 机械传代；避免过度酶切丢失异质性。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. SOX2 / Nestin ± MAP2；支原体；与原发灶对照。
  2. 药敏 / CAR-T 臂设溶媒[1]。
  3. 原位成瘤走移植 SOP，不是本页。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
Neurobasal + B-27 / N-2神经肿瘤基底[1][2]打开 →
EGF + FGF2GBO 核心生长因子打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
超低吸附板悬浮 / 药敏对照可选打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 FGF2MGF30006前列腺等上皮 niche；脑 / PSC 诱导也常见蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
SOX2SOX2 抗体MCAB5268神经祖 / 多能干性标记
NestinNestin 抗体MCAB5655神经祖细胞中间丝；脑 / GBM
MAP2MAP2 抗体MDAB12803成熟神经元树突标记；脑 / GBM 可选
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
N-2 补充剂 100×MC318神经 / 部分上皮配方常用；与 B-27 按体系选用
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
Neurobasal 培养基MC424脑 / 神经 / GBM 类器官基底
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
按本表询价培养补充剂分类

参考文献

  1. [1] Generation and biobanking of patient-derived glioblastoma organoids and their application in CAR T cell testing. Nat Protoc. 2020. PMID 33169003
  2. [2] Generation of glioblastoma patient-derived organoids and mouse brain orthotopic xenografts for drug screening. STAR Protoc. 2021. PMID 33665625

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。