细胞培养 / 类器官 / 肺癌 PDO

肺癌 PDO 建库 protocol

患者来源肺癌类器官：肿瘤消化包埋后用气道/肺泡样上皮 niche（EGF / FGF7·10 / Noggin / R-spondin ± Wnt）扩增，按组织学亚型做 CK / EpCAM 质控与药敏。[1][2][3]

适用场景

肺癌 PDO，不是气道类器官发育全程，也不是 A549 球体。

用途适合度主要读出说明
肺腺癌 / 鳞癌手术标本 PDO 药敏推荐活力、形态、与临床响应对照[1][3]驱动突变记录决定药敏分臂。
正常气道类器官对照对照毒性 / 分化对照[2]正常气道与肿瘤分皿；配方可接近但勿混药敏板。
A549 / H1299 球体勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

肺肿瘤小团 → dome → FGF/EGF niche → 短期 Y-27632 → 机械传代 → CK/EpCAM + 支原体 → 按亚型药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录组织学（腺癌 / 鳞癌 / 小细胞等）与驱动突变
  2. 剔除坏死与明显软骨；胶原酶消化至上皮小团
  3. 基质胶 dome；气道样培养基（EGF、FGF7/10、Noggin、R-spondin ± Wnt）[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632 + A83-01 限制间质；观察囊状/实性生长
  5. 换液 2–3 天；1–3 周按生长机械传代
  6. CK8/19、EpCAM、E-Cadherin；支原体；与原发灶 IHC/NGS 对照
  7. 药敏按驱动基因设臂（EGFR-TKI、化疗等）；设溶媒
  8. 体内验证走移植 SOP，不是本页

第 1 步 · 肿瘤处理

  1. 记录取材部位（肺叶 / 转移灶）与放化疗史。
  2. 胶原酶 ± Dispase 至小团；过筛离心；红细胞多时短时裂红（MC427）。
  3. 小细胞或低分化标本酶切更短，避免打成纯单细胞。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. 先用完整气道样配方让上皮活下来[2]。
  2. 间质长满时上调 A83-01 或缩短消化；不要无限加血清。
  3. 腺癌与鳞癌形态差异大，分皿记录，勿混库。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 机械微簇传代；建库前 CK / EpCAM / E-Cadherin。
  2. 药敏在稳定传代后进行；EGFR 突变臂与化疗臂分板[1]。
  3. Ki-67 可作给药前后增殖对照。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + FGF7 / FGF10 + Noggin + R-spondin气道样核心[1][2]打开 →
Wnt3a（按体系）部分建库起步需要打开 →
A83-01抑 TGF-β / 间质打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
红细胞裂解液血性消化后短时裂红打开 →
VEGF-A（血管共培养扩展）默认上皮 PDO 不加；内皮共培养另立打开 →
ATRA（肺泡 / 谱系窗口）默认气道扩增不加；定向窗口另皿打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制；人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7；减少间质长满询价
全反式维甲酸（ATRA）MCK1837肺气道–肺泡定向窗口；默认扩增一般不加询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗；ENR / PDO niche；双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大；长期扩增蛋白询价
重组人 Wnt3aMGF30004人结肠 / CRC 建库 / 导管 / 胃 / 卵巢 / 肝 Wnt蛋白询价
重组人 NRG1MGF30005乳腺类器官 Sachs 关键；部分肺配方可选蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价
重组人 FGF7（KGF）MGF30008乳腺 / 气道上皮配方常用蛋白询价
重组人 VEGF-A（VEGF165）MGF30015血管 / 内皮共培养扩展；默认上皮 PDO 主流程一般不加蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
CK8CK8 抗体MCAB5383腔面 / 上皮谱系
CK19CK19 抗体MCAB5312导管 / 胆管样上皮；胰与部分肺 / 卵巢 / 膀胱 / 头颈
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮；多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
Ki-67Ki-67 抗体B10315增殖指数；药敏前后对照
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
N-2 补充剂 100×MC318神经 / 部分上皮配方常用；与 B-27 按体系选用
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
N-乙酰半胱氨酸（NAC）MC417前列腺等上皮配方抗氧化组分
氢化可的松MC418乳腺 / 气道等上皮配方添加剂
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红
按本表询价培养补充剂分类

参考文献

  1. [1] Patient-derived lung cancer organoids as in vitro cancer models for therapeutic screening. Nat Commun. 2019. PMID 31467275
  2. [2] Long-term expanding human airway organoids for disease modeling. EMBO J. 2019. PMID 30643021
  3. [3] Human Lung Adenocarcinoma-Derived Organoid Models for Drug Screening. Cell Rep. 2020. PMID 32771979

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。