细胞培养 / 类器官 / 软组织肉瘤 PDO

软组织肉瘤 PDO 建库 protocol

患者来源软组织肉瘤类器官 / tumoroid(含小圆细胞肉瘤、MPNST、横纹肌肉瘤等):消化包埋后用间充质–肿瘤 niche(EGF / FGF2 ± VEGF;短期 Y-27632)建库,按亚型做 Desmin / Myogenin / S100 等质控与药敏,并与骨肉瘤分册。[1][2]

适用场景

软组织肉瘤 PDO,不是 MG-63 / HT-1080 球体,也不是骨肉瘤 SOP 改名。

用途适合度主要读出说明
小圆细胞肉瘤 / MPNST 等 PDO 活库与靶向药敏推荐融合保持、药敏(如 MCL-1 / SHH 相关)[1][2]tumoroid 生物库显示 CIC::DUX4 等亚型有可操作脆弱性。
横纹肌肉瘤融合阳性类器官对照对照肌源性标记 / 融合依赖药敏与骨肉瘤、上皮 PDO 分库;基质批号单独记录。
HT-1080 / RD 球体当 PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

肉瘤小团 → dome → EGF/FGF2 niche → 短期 Y-27632 → 传代 → 亚型标记 → 药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链;记录组织学亚型、融合基因(如 CIC::DUX4)与取材部位
  2. 剔除坏死;胶原酶温和消化至小团;血性短时裂红(MC427)
  3. 基质胶 / 胶原包埋(锁定类型与批号);EGF / FGF2 ± VEGF[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632;观察实性生长
  5. 换液 2–3 天;机械或温和酶传代;亚型分皿建库
  6. 亚型标记(Desmin / Myogenin / S100 等按课题);支原体;与原发灶对照
  7. 药敏设溶媒;体内成瘤走移植 SOP,不是本页

第 1 步 · 取材与消化

  1. 记录亚型与融合状态;分器械。
  2. 胶原酶(MC412)温和至小团;血性短时裂红(MC427)。
  3. 勿打成纯单细胞。

第 2–3 步 · 基质与 niche

  1. 锁定 BME 或胶原 I 型批号后再开库。
  2. EGF / FGF2 ± VEGF;与上皮 PDO 分批。
  3. 亚型分皿;机械或温和酶传代。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 亚型标记 + 形态;支原体;与原发灶对照。
  2. 药敏设溶媒;解读对照融合/通路假设[1][2]。
  3. 体内验证走移植 SOP,不是本页。

Niche 试剂起点(须滴定)

下表为文献常见起点,不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + FGF2 ± VEGF软组织肉瘤核心[1][2]打开 →
BME / 胶原 I 型(选定一种)基质类型影响生长与药敏打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
超低吸附 / 圆底读板药敏读出打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号;价格均为询价。生长因子(EGF/Noggin/R-spondin 等)属蛋白类,见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制;接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制;人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7;减少间质长满询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号;价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 FGF2MGF30006前列腺等上皮 niche;脑 / PSC 诱导也常见蛋白询价
重组人 VEGF-A(VEGF165)MGF30015血管 / 内皮共培养扩展;默认上皮 PDO 主流程一般不加蛋白询价

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记;深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
p53p53 抗体B10301高级别浆液性卵巢癌 / 食管 / 头颈等常见;与原发灶对照
DesminDesmin 抗体MCAB5218肌源性中间丝;横纹肌肉瘤等软组织肉瘤质控
MyogeninMyogenin 抗体MCAB8830横纹肌肉瘤肌源性转录因子质控
S100S100 抗体MCAB6849MPNST / 神经鞘来源辅助质控

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号;浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,200 mM)MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染;稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质(BME)MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液(1 M)MC305类器官培养基缓冲;按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选;可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂(Primocin 类)MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底(U 底)96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板;与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红
I 型胶原(鼠尾 / 牛源)MC431骨肉瘤 / 软组织肉瘤基质对照;与 BME 对照时锁定批号

参考文献

  1. [1] Small round cell sarcoma tumoroid biobank reveals CIC::DUX4 sarcoma vulnerability to MCL-1 inhibition. Nat Commun. 2025. PMID 40841360
  2. [2] Establishment of a patient-derived malignant peripheral nerve sheath tumor organoid model reveals SHH pathway activation and therapeutic vulnerability. Hum Cell. 2026. PMID 42658353
免责声明:仅供科研参考(RUO),不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。