细胞培养 / 类器官 / 卵巢癌 PDO

卵巢癌 PDO 建库 protocol

患者来源卵巢癌类器官：消化包埋后用 Kopper 型上皮 niche（R-spondin / Noggin / EGF / FGF10 ± Wnt、烟酰胺、A83-01、Forskolin 等）扩增，按组织学亚型做 PAX8 / CK / p53 质控与铂类药敏。[1][2][3]

适用场景

卵巢癌 PDO，不是 SKOV3 球体，也不是正常输卵管上皮扩增全程。

用途适合度主要读出说明
卵巢癌手术 / 腹水 PDO 活库与铂类药敏推荐亚型保持、药敏与临床响应对照[1]Kopper 平台覆盖主要亚型并支持药敏与异种移植。
正常输卵管 / 卵巢表面上皮对照对照毒性对照正常与肿瘤分皿；配方可接近但勿混药敏板。
SKOV3 / OVCAR 球体勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

卵巢肿瘤 / 腹水小团 → dome → Rspo/FGF10 niche → 短期 Y-27632 → 机械传代 → PAX8/CK/p53 → 铂类药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录组织学亚型（HGSOC / LGSOC / 透明细胞 / 黏液等）与 BRCA / HRD
  2. 实体瘤剔除坏死；腹水离心取细胞团；胶原酶至小团
  3. 基质胶 dome；Kopper 型培养基（Rspo、Noggin、EGF、FGF10 ± Wnt、烟酰胺、A83-01、Forskolin 等）[[1]]
  4. 短期 Y-27632；观察囊状 / 实性生长
  5. 换液 2–3 天；按生长机械传代
  6. PAX8、CK8/18/19、EpCAM、p53；支原体；与原发灶对照
  7. 药敏：铂类 ± PARP 抑制等按课题；设溶媒[[1]][[2]]
  8. 体内成瘤 / PDX 走移植 SOP，不是本页

第 1 步 · 标本处理

  1. 记录取材（原发 / 网膜 / 腹水）与既往铂类史。
  2. 腹水：低速离心取细胞团，必要时短时裂红（MC427）；实体瘤胶原酶至小团。
  3. 黏液丰富标本充分洗涤，避免污染后续 dome。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. 先用完整 Kopper 型配方让上皮活下来[1]。
  2. HGSOC 与 LGSOC / 透明细胞分皿记录，勿混库。
  3. 间质长满时上调 A83-01 或缩短消化。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 机械微簇传代；建库前 PAX8 / CK / p53 / EpCAM。
  2. 药敏在稳定传代后做铂类 ± PARP；设溶媒与复发灶对照（若有）[1][2]。
  3. 体内验证走移植模型；细胞株活力读数见造模页，勿与 PDO 步骤混用。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
R-spondin + Noggin + EGF + FGF10 ± Wnt3aKopper 核心[1]打开 →
烟酰胺 / A83-01 / Forskolin人卵巢配方常见打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
B-27 补充剂无血清基底打开 →
红细胞裂解液腹水 / 血性标本短时裂红打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制；人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7；减少间质长满询价
ForskolinMCK1832腺苷酸环化酶；cAMP；卵巢等配方常见询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗；ENR / PDO niche；双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大；长期扩增蛋白询价
重组人 Wnt3aMGF30004人结肠 / CRC 建库 / 导管 / 胃 / 卵巢 / 肝 Wnt蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
CK8CK8 抗体MCAB5383腔面 / 上皮谱系
CK18CK18 抗体MCAB5028腔面上皮；乳腺/前列腺/卵巢/内膜常用
CK19CK19 抗体MCAB5312导管 / 胆管样上皮；胰与部分肺 / 卵巢 / 膀胱 / 头颈
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮；多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
PAX8PAX8 抗体MCAB5911卵巢 / 苗勒管 / 内膜 / 肾来源上皮质控
p53p53 抗体B10301高级别浆液性卵巢癌 / 食管 / 头颈等常见；与原发灶对照
Ki-67Ki-67 抗体B10315增殖指数；药敏前后对照
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
N-2 补充剂 100×MC318神经 / 部分上皮配方常用；与 B-27 按体系选用
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
ITS 补充剂 100×MC311胰岛素-转铁蛋白-硒；部分上皮配方
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红
按本表询价培养补充剂分类

参考文献

  1. [1] An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity. Nat Med. 2019. PMID 31011202
  2. [2] A living biobank of ovarian cancer ex vivo models reveals profound mitotic heterogeneity. Nat Commun. 2020. PMID 32054838
  3. [3] A living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity. Cell. 2018. PMID 29224780

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。