细胞培养 / 类器官 / 皮肤类器官

皮肤 / 表皮类器官 protocol

人表皮干细胞扩增与空气–液面（ALI）分层重建提纲：无血清表皮 niche（EGF / FGF / Noggin / R-spondin 等）扩增后，可转 ALI 读出屏障 / 分层；PSC 带毛囊皮肤类器官作长周期对照，不作默认一周建库处方。[1][2]

适用场景

表皮类器官 / ALI，不是单纯 HaCaT 单层，也不是完整带毛 PSC 皮肤 130 天课程默认处方。

用途适合度主要读出说明
原代表皮类器官扩增与皮肤感染 / 屏障课题推荐分层标记、屏障功能、感染读出[1]无血清配方利于降低批次干扰；ALI 与扩增分阶段记录。
PSC 带毛囊皮肤类器官（长周期）对照毛囊 / 附属器出现[2]周期可达数十至百余天；与本页原代扩增分库。
HaCaT 单层当皮肤类器官勿混用2D 汇合2D 角质形成细胞株不是 3D 表皮类器官。

一句话造模

表皮细胞 → 无血清 niche 扩增 → 可选 ALI 分层 → CK/屏障读出；PSC 带毛路线另立长周期对照。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录取材部位（包皮 / 躯干等）与供体信息
  2. 分离表皮细胞；胶原酶 / Dispase 按文献滴定至小团或原代角质形成细胞
  3. 无血清表皮 niche（EGF、FGF、Noggin、R-spondin、A83-01 等）扩增[[1]]
  4. 短期 Y-27632（接种窗口）；记录代数与基质 / insert 批号
  5. 可选：转空气–液面（ALI）诱导分层与屏障相关读出
  6. EpCAM / CK / E-Cadherin；支原体；感染或药敏另立对照臂
  7. PSC 带毛囊长周期路线仅作对照[[2]]，勿与本页一周扩增混步骤

第 1 步 · 表皮分离

  1. 按部位记录供体信息；无菌取材。
  2. Dispase / 胶原酶按文献滴定；优先保留基底层细胞。
  3. 勿过度酶切至碎片。

第 2–3 步 · 扩增与可选 ALI

  1. 无血清表皮 niche 起步[1]；记录因子批次。
  2. 需要分层 / 屏障读出时再转 ALI；勿与扩增培养基混批。
  3. 机械或温和酶传代；记录代数。

第 4–5 步 · 质控与扩展课题

  1. EpCAM / CK / E-Cadherin；支原体。
  2. 感染 / 药敏设对照臂；解读对照组织学。
  3. PSC 带毛路线另立 SOP 时间表[2]。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + Noggin + R-spondin ± FGF表皮扩增核心[1]打开 →
A83-01 / Forskolin（按文献）人表皮配方常见打开 →
B-27 / N-2无血清补充打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
超低吸附板（EB / 聚集体对照）PSC 路线聚集体可选打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制；人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7；减少间质长满询价
ForskolinMCK1832腺苷酸环化酶；cAMP；卵巢等配方常见询价
全反式维甲酸（ATRA）MCK1837肺气道–肺泡定向窗口；默认扩增一般不加询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗；ENR / PDO niche；双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大；长期扩增蛋白询价
重组人 Wnt3aMGF30004人结肠 / CRC 建库 / 导管 / 胃 / 卵巢 / 肝 Wnt蛋白询价
重组人 FGF2MGF30006前列腺等上皮 niche；脑 / PSC 诱导也常见蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮；多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
N-2 补充剂 100×MC318神经 / 部分上皮配方常用；与 B-27 按体系选用
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
角质形成细胞无血清培养基（KSFM）MC428前列腺 CSS 场景；皮肤 / 表皮配方可对照
按本表询价培养补充剂分类

参考文献

  1. [1] Human primary epidermal organoids enable modeling of dermatophyte infections. Cell Death Dis. 2021. PMID 33414472
  2. [2] Generation and characterization of hair-bearing skin organoids from human pluripotent stem cells. Nat Protoc. 2022. PMID 35322210

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。