细胞培养 / 类器官 / 骨肉瘤 PDO

骨肉瘤 PDO 建库 protocol

患者来源骨肉瘤类器官:活检 / 切除标本消化后包埋于选定基质,用间充质–肿瘤 niche(EGF / FGF2 ± VEGF;短期 Y-27632)建库,读出侵袭与基因组指导药敏 / 免疫对照;基质类型会影响侵袭与药敏,须固定批号。[1][2]

适用场景

骨肉瘤 PDO,不是 MG-63 球体,也不是普通上皮 PDO 配方。

用途适合度主要读出说明
骨肉瘤 PDO 活库、侵袭与基因组指导药敏推荐基质依赖侵袭与药敏差异[1]更换基质类型等于换实验条件,须重滴定。
PDX–类器官交互库与免疫浸润对照对照T 细胞浸润 / 免疫治疗预实验[2]共培养条件另立课题;与默认扩增分皿。
MG-63 / U2OS 球体当 PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

骨肉瘤小团 → 选定基质包埋 → EGF/FGF2 niche → 短期 Y-27632 → 传代 → 侵袭/药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链;记录解剖部位、分级与驱动基因(若有)
  2. 剔除坏死与明显矿化碎片;胶原酶温和消化至小团
  3. 选定基质包埋(BME / 胶原等按课题);记录类型与批号[[1]]
  4. EGF / FGF2 ± VEGF;短期 Y-27632
  5. 换液 2–3 天;机械或温和酶传代;避免过度消化
  6. 成骨 / 间充质谱系标记(按课题);支原体;与原发灶对照
  7. 侵袭与药敏 / 免疫对照设溶媒;体内成瘤走移植 SOP,不是本页

第 1 步 · 取材与消化

  1. 记录部位与分子信息;尽量减少矿化碎屑干扰。
  2. 胶原酶(MC412)温和至小团;勿打成纯单细胞。
  3. 需要时短时裂红(MC427)。

第 2–3 步 · 基质与 niche

  1. 开库前锁定基质类型与批号[1]。
  2. EGF / FGF2 ± VEGF;与上皮 PDO 配方分批。
  3. 机械或温和酶传代;记录代数。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 谱系标记(按课题)+ 形态;支原体;与原发灶对照。
  2. 侵袭与药敏 / 免疫臂设溶媒[1][2]。
  3. 体内验证走移植 SOP,不是本页。

Niche 试剂起点(须滴定)

下表为文献常见起点,不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + FGF2 ± VEGF骨肉瘤核心[1][2]打开 →
基底膜基质 / 胶原(选定一种)基质类型影响侵袭与药敏[1]打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
超低吸附 / 圆底读板药敏读出打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号;价格均为询价。生长因子(EGF/Noggin/R-spondin 等)属蛋白类,见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制;接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制;人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7;减少间质长满询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号;价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 FGF2MGF30006前列腺等上皮 niche;脑 / PSC 诱导也常见蛋白询价
重组人 VEGF-A(VEGF165)MGF30015血管 / 内皮共培养扩展;默认上皮 PDO 主流程一般不加蛋白询价

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记;深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
p53p53 抗体B10301高级别浆液性卵巢癌 / 食管 / 头颈等常见;与原发灶对照
SATB2SATB2 抗体MCAB5103骨肉瘤 / 成骨谱系辅助质控
RUNX2RUNX2 抗体MCAB5864成骨转录因子;骨肉瘤质控

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号;浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,200 mM)MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染;稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质(BME)MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液(1 M)MC305类器官培养基缓冲;按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选;可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂(Primocin 类)MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底(U 底)96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板;与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红
I 型胶原(鼠尾 / 牛源)MC431骨肉瘤 / 软组织肉瘤基质对照;与 BME 对照时锁定批号

参考文献

  1. [1] Matrix type influences embedded patient-derived osteosarcoma organoid invasion and response to treatment. Front Pharmacol. 2026. PMID 42311411
  2. [2] Reconstruction of T cell infiltration in an osteosarcoma PDX-organoid interactive biobank for personalized immunotherapy. Cell Rep Med. 2026. PMID 41763214
免责声明:仅供科研参考(RUO),不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。