细胞培养 / 类器官 / 甲状腺癌 PDO

甲状腺癌 PDO 建库 protocol

患者来源甲状腺乳头状癌等类器官:消化包埋后用甲状腺上皮 niche(EGF / FGF / R-spondin / Noggin、A83-01 等)建库,读出甲状腺标记与碘摄取相关分子,并可做药敏 / RAI 相关对照。[1][2]

适用场景

甲状腺 PDO,不是 TPC-1 球体,也不是正常滤泡上皮扩增全程。

用途适合度主要读出说明
PTC 手术标本 PDO 与 RAI 耐药表型对照推荐甲状腺标记、碘摄取相关分子、药敏[1]Sondorp 等显示 PTC 与 RAI 耐药类器官在蛋白/转录层面可区分。
长期维持甲状腺癌类器官(条件培养基等)对照遗传 / 表型保持[2]按 STAR Protocols 滴定;勿与正常滤泡混库。
TPC-1 / BCPAP 球体当 PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

甲状腺肿瘤小团 → dome → EGF/Rspo niche → 短期 Y-27632 → 机械传代 → 甲状腺标记 → 药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链;记录组织学(PTC / FTC / MTC / ATC)与 BRAF / RAS 等分子分型
  2. 剔除坏死;胶原酶 ± Dispase 至小团;血性短时裂红(MC427)
  3. 基质胶 dome;甲状腺上皮 niche(EGF、FGF、R-spondin、Noggin、A83-01 等)[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632;观察囊状生长
  5. 换液 2–3 天;机械传代;分化型与未分化 / 髓样分皿
  6. 甲状腺标记(如 Tg / TTF-1 / PAX8 按课题)、EpCAM;支原体
  7. 药敏或 RAI 相关读出设对照;体内成瘤走移植 SOP,不是本页

第 1 步 · 取材与消化

  1. 记录组织学与分子分型;正常与肿瘤分器械。
  2. 胶原酶(MC412)± Dispase(MC413)至小团;血性短时裂红(MC427)。
  3. 勿打成纯单细胞。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. 按文献甲状腺配方起步[1][2]。
  2. 分化型与未分化 / 髓样分皿建库。
  3. 机械传代;记录代数与 BME 批号。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 甲状腺标记 + EpCAM;支原体;与原发灶对照。
  2. RAI / 靶向药敏设溶媒与对照臂[1]。
  3. 体内验证走移植模型,不是本页。

Niche 试剂起点(须滴定)

下表为文献常见起点,不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + Noggin + R-spondin ± FGF甲状腺上皮核心[1][2]打开 →
A83-01 / 烟酰胺人上皮稳定打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
红细胞裂解液血性标本短时裂红打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号;价格均为询价。生长因子(EGF/Noggin/R-spondin 等)属蛋白类,见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制;接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制;人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7;减少间质长满询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号;价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗;ENR / PDO niche;双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大;长期扩增蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记;深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮;多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
PAX8PAX8 抗体MCAB5911卵巢 / 苗勒管 / 内膜 / 肾来源上皮质控
CK7CK7 抗体MCAB5547胆管 / 尿路 / 部分肾小管 / 食管 / 甲状腺 / 间皮上皮质控

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号;浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,200 mM)MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染;稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质(BME)MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液(1 M)MC305类器官培养基缓冲;按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选;可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂(Primocin 类)MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底(U 底)96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板;与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红

参考文献

  1. [1] Patient-Derived Papillary Thyroid Cancer Organoids for Radioactive Iodine Refractory Screening. Cancers. 2020. PMID 33142750
  2. [2] Establishment and maintenance of thyroid organoids from human cancer cells. STAR Protoc. 2022. PMID 35600922
免责声明:仅供科研参考(RUO),不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。