细胞培养 / 类器官 / 黑色素瘤 PDO

黑色素瘤 PDO 建库 protocol

患者来源黑色素瘤类器官 / tumoroid：消化包埋后用黑素细胞–肿瘤 niche（EGF / FGF2 为核心，± Noggin / R-spondin / Wnt；短期 Y-27632）建库，读出谱系标记与靶向 / 免疫药敏对照；脑转移标本可作匹配对照。[1][2]

适用场景

黑色素瘤 PDO，不是 A375 球体，也不是完整 TIL 扩增课程。

用途适合度主要读出说明
皮肤 / 转移黑色素瘤 PDO 活库与靶向药敏推荐分子保持、药敏与临床对照[2]脑转移匹配类器官可镜像靶向反应差异。
PDO–免疫共培养 / 抗肿瘤免疫读出对照免疫杀伤 / 细胞因子[1]共培养条件另立课题；勿与默认扩增混批。
A375 / SK-MEL 球体当 PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

黑色素瘤小团 → dome → EGF/FGF2 niche → 短期 Y-27632 → 机械传代 → 谱系标记 → 靶向/免疫药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链；记录原发 / 转移部位、BRAF / NRAS / NF1 等分子分型
  2. 剔除坏死；胶原酶 ± Dispase 至小团；血性短时裂红（MC427）
  3. 基质胶 dome；EGF / FGF2 核心 niche（± Noggin / R-spondin / Wnt 按文献）[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632；观察实性 / 半囊状生长
  5. 换液 2–3 天；机械传代；原发与脑转移分皿
  6. 谱系标记（SOX10 / MITF / Melan-A 等按课题）、E-Cadherin；支原体
  7. 靶向 / 免疫对照臂设溶媒；体内成瘤走移植 SOP，不是本页

第 1 步 · 肿瘤处理

  1. 记录原发 / 转移与驱动突变；分器械。
  2. 胶原酶（MC412）± Dispase（MC413）至小团；血性短时裂红（MC427）。
  3. 勿打成纯单细胞。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. 以 EGF / FGF2 起步；Wnt/Noggin/Rspo 按文献可选[1][2]。
  2. 原发与脑转移分库；记录代数与基质批号。
  3. 机械传代优先。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. 谱系标记 + E-Cadherin；支原体；与原发灶对照。
  2. 靶向 / 免疫臂设溶媒；解读对照临床史[1][2]。
  3. 体内验证走移植 SOP，不是本页。

Niche 试剂起点（须滴定）

下表为文献常见起点，不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + FGF2黑色素瘤核心[1][2]打开 →
Noggin / R-spondin ± Wnt（可选）按文献滴定；非默认肠 ENR打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
红细胞裂解液血性标本短时裂红打开 →
超低吸附 / 圆底读板药敏 / 免疫对照读出打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号；价格均为询价。生长因子（EGF/Noggin/R-spondin 等）属蛋白类，见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制；接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制；人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7；减少间质长满询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价
按本表询价全部小分子

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号；价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 NogginMGF30002BMP 拮抗；ENR / PDO niche；双 SMAD 神经诱导常用蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大；长期扩增蛋白询价
重组人 Wnt3aMGF30004人结肠 / CRC 建库 / 导管 / 胃 / 卵巢 / 肝 Wnt蛋白询价
重组人 FGF2MGF30006前列腺等上皮 niche；脑 / PSC 诱导也常见蛋白询价
重组人 VEGF-A（VEGF165）MGF30015血管 / 内皮共培养扩展；默认上皮 PDO 主流程一般不加蛋白询价
按本表询价蛋白 / 酶 / 多肽分类

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记；深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
p53p53 抗体B10301高级别浆液性卵巢癌 / 食管 / 头颈等常见；与原发灶对照
SOX10SOX10 抗体MCAB5826黑色素瘤 / 神经嵴谱系质控
MiTFMiTF 抗体MCAB6661黑色素细胞分化转录因子质控
Melan-AMelan-A / MART-1 抗体MCAB5604黑色素细胞分化标记；皮肤 / 葡萄膜黑色素瘤质控
按本表询价抗体分类

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号；浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，200 mM）MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染；稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质（BME）MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液（1 M）MC305类器官培养基缓冲；按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选；可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂（Primocin 类）MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底（U 底）96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板；与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红
按本表询价培养补充剂分类

参考文献

  1. [1] Modeling anti-tumor immune responses using patient-derived melanoma organoids. Cancer Immunol Immunother. 2025. PMID 41432764
  2. [2] Matched three-dimensional organoids and two-dimensional cell lines of melanoma brain metastases mirror response to targeted therapy. Sci Rep. 2024. PMID 39438602

相关入口

其他分步 SOP

免责声明：仅供科研参考（RUO），不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。