细胞培养 / 类器官 / 间皮瘤 PDO

间皮瘤 PDO 建库 protocol

患者来源胸膜 / 腹膜恶性间皮瘤类器官:手术或恶性积液标本消化包埋后,用间皮–肿瘤 niche(EGF / FGF2 ± HGF、短期 Y-27632)建库,做上皮样 / 肉瘤样分型质控与铂类等药敏,并可衔接 HIPEC 相关对照。[1][2]

适用场景

间皮瘤 PDO,不是 NCI-H28 球体,也不是普通肺癌 PDO 改名。

用途适合度主要读出说明
胸膜 / 腹膜间皮瘤 PDO 与铂类耐药表型推荐代谢 / 药敏与临床暴露对照[1]高保真平台可镜像顺铂耐受动态。
腹膜间皮瘤 HIPEC 相关药物组合预实验对照联合方案敏感性[2]HIPEC 体内药代另立课题;体外只作浓度对照。
NCI-H28 / MSTO 球体当 PDO勿混用球体直径细胞株球体不是患者 PDO。

一句话造模

间皮瘤小团 / 积液细胞 → dome → EGF/FGF2 niche → 短期 Y-27632 → 传代 → EpCAM/CK → 铂类药敏。

流程概览

  1. 伦理 + 冷链;记录胸膜 / 腹膜、上皮样 / 肉瘤样 / 双相,以及既往铂类暴露
  2. 切除标本微切消化,或恶性积液离心富集;血性短时裂红(MC427)
  3. 基质胶 dome;EGF / FGF2 ± HGF 间皮–肿瘤 niche[[1]][[2]]
  4. 短期 Y-27632;观察囊状 / 实性生长
  5. 换液 2–3 天;机械传代;组织学亚型分皿
  6. EpCAM、CK、E-Cadherin(按亚型);支原体;与原发灶对照
  7. 铂类 / HIPEC 相关药敏设溶媒;体内成瘤走移植 SOP,不是本页

第 1 步 · 取材与消化

  1. 记录部位与组织学亚型;积液与实体瘤分流程。
  2. 胶原酶(MC412)± Dispase(MC413)至小团;血性短时裂红(MC427)。
  3. 勿打成纯单细胞。

第 2–3 步 · niche 与扩增

  1. EGF / FGF2 ± HGF 起步[1][2];上皮样与肉瘤样分库。
  2. 勿与肺癌 PDO 培养基混批。
  3. 机械传代;记录代数与基质批号。

第 4–5 步 · 质控与药敏

  1. EpCAM / CK / E-Cadherin;支原体;与原发灶对照。
  2. 铂类 / 联合臂设溶媒[1][2]。
  3. 体内验证走移植 SOP,不是本页。

Niche 试剂起点(须滴定)

下表为文献常见起点,不是本站处方浓度。

组分角色站内
EGF + FGF2 ± HGF间皮–肿瘤核心[1][2]打开 →
Y-27632 短期接种窗口打开 →
红细胞裂解液血性 / 积液短时裂红打开 →
超低吸附 / 圆底读板药敏读出打开 →
胶原酶 II 型组织 / 肿瘤消化至上皮小团打开 →
Dispase II与胶原酶联用温和解离打开 →
类器官冻存液建库冻存打开 →

本流程小分子货号

深链到在售货号;价格均为询价。生长因子(EGF/Noggin/R-spondin 等)属蛋白类,见蛋白/酶/多肽分类。

化合物SKU用途价格
Y-27632MCK1042ROCK 抑制;接种/传代后短期提高存活询价
SB202190MCK1279p38 抑制;人上皮类器官稳定询价
A83-01MCK1825ALK4/5/7;减少间质长满询价
烟酰胺MCK1836人上皮类器官配方常见询价

本流程蛋白 / 多肽货号

生长因子与胃泌素等深链货号;价格均为询价。活性与复溶以批号 COA 为准。

产品SKU用途类型价格
重组人 EGFMGF30001上皮扩增核心生长因子蛋白询价
重组人 R-spondin-1MGF30003Wnt 放大;长期扩增蛋白询价
重组人 Wnt3aMGF30004人结肠 / CRC 建库 / 导管 / 胃 / 卵巢 / 肝 Wnt蛋白询价
重组人 FGF2MGF30006前列腺等上皮 niche;脑 / PSC 诱导也常见蛋白询价
重组人 FGF10MGF30007前列腺 / 胰腺 / 乳腺 / 肺 / 胃 / 卵巢 / 肝 / 内膜 / 肾 niche蛋白询价
重组人 HGFMGF30010人肝胆管类器官关键蛋白询价
重组人 VEGF-A(VEGF165)MGF30015血管 / 内皮共培养扩展;默认上皮 PDO 主流程一般不加蛋白询价

本流程质控抗体货号

建库 / 药敏前 IHC·IF 常用标记;深链现有抗体货号。稀释与种属以说明书为准。

标记产品SKU用途
EpCAMEpCAM 抗体MCAB5377广谱上皮;多组织 PDO 通用
E-CadherinE-Cadherin 抗体MCAB1155上皮完整性 / EMT 对照
p53p53 抗体B10301高级别浆液性卵巢癌 / 食管 / 头颈等常见;与原发灶对照
CK7CK7 抗体MCAB5547胆管 / 尿路 / 部分肾小管 / 食管 / 甲状腺 / 间皮上皮质控
CalretininCalretinin 抗体MCAB7078间皮瘤上皮样亚型常用质控
WT1WT1 抗体MDAB15817间皮瘤辅助质控;与原发灶对照

本流程培养补充剂货号

B-27 / N-2 / 谷氨酰胺 / 双抗等现有细胞培养货号;浓度按说明书与文献滴定。

产品SKU用途
Advanced DMEM/F12 培养基MC410无血清类器官基底培养基
B-27 补充剂 50×MC317无血清上皮 / 神经类器官基底补充
稳定型谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,200 mM)MC301Advanced DMEM/F12 体系谷氨酰胺来源
青霉素-链霉素双抗溶液 100×MC306建库早期防污染;稳定后可评估撤除
类器官基底膜基质(BME)MC411dome / sandwich 三维包埋
胶原酶 II 型MC412组织 / 肿瘤消化至上皮小团
Dispase IIMC413与胶原酶联用温和解离
Accutase 温和解离液MC414传代温和酶解备选
类器官冻存液MC415建库冻存
支原体检测试剂盒MC416建库前无菌质控
HEPES 缓冲液(1 M)MC305类器官培养基缓冲;按配方终浓度加入
胶原酶 IV 型MC421解离备选;可与 II 型对照
类器官原代抗菌添加剂(Primocin 类)MC423原代 / PDO / PSC 建库早期防污染
超低吸附 96 孔板MC425EB 形成 / 球体 / 药敏读板
圆底(U 底)96 孔板MC430球体沉降 / 共培养读板;与 ULA 分工
红细胞裂解液MC427血性标本消化后裂红

药敏 ↔ 球体 / 造模 / 移植分工

本页 PDO 药敏在基质胶 dome 内完成,读数与给药窗口按本 SOP。细胞株球体 / 2D 活力读数走球状体专页与细胞造模;体内成瘤与 PDX 走细胞移植模型。勿把三条流程的步骤混用。

参考文献

  1. [1] A High-Fidelity Patient-Derived Organoid Platform Recapitulates the Dynamic Metabolic Landscape of Cisplatin Tolerance in Mesothelioma. Cancers. 2026. PMID 42192862
  2. [2] Patient-Derived Organoid Models and Precision HIPEC in Diffuse Malignant Peritoneal Mesothelioma: Modeling Heterogeneity to Address Recurrence. Int J Mol Sci. 2026. PMID 42737808
免责声明:仅供科研参考(RUO),不构成临床诊疗或实验室法定操作规范。人体组织须取得伦理批件。文内 [n] 对应参考文献。浓度与消化时间必须本地滴定。